一.器材
离心管,弯头镊子,离心机,移液器
二.步骤
1. 摘除眼球采血
(1)左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤,小指固定尾部;
(2)中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位,无名指按在腹部,捻动拇指,轻压取血侧眼部皮肤,使眼球充血突出;
(3)用弯头镊夹取眼球;
(4)根据需要捻动拇指与食指的方向,使血液从眼眶内以不同速度垂直流入离心管;
(5)同时用左手中指轻按小鼠心脏部位,以加快心脏泵血速度;
(6)当血液流尽时,用脱臼法处死小鼠。
2. 分离血清
(1)将离心管中的血置37℃温箱或水浴1小时,也可室温2小时;
(2)再置4℃冰箱内3~4小时或过夜;
(3)待血液凝固血块收缩后,4000rpm离心10分钟;
(4)取上清于干净的离心管中,保存于-20℃,或加入防腐剂(0.01%硫柳汞或0.02%叠氮钠),置4℃冰箱中保存备用。
三.注意:
1. 采血前,可给小鼠喂点水;
2. 摘眼球采血取血量能达0.8~1.2ml,但老年和疾病小鼠血量会降低;
3. 采血场所有充足的光线;室温夏季保持在25~28℃,冬季,15~20℃为宜;
4. 防止血液浸入眼部周围毛发,否则会造成污染和溶血;
5. 按压心脏时,用力一定要适度,若用力过度,一是会造成动物采血中途死亡,使采血不完全,二是有可能引起溶血现象发生,影响实验结果;
6. 采血用的器材和试管必须保持清洁干燥;
7. 采血时要防止小鼠挣扎,否则会损失比较多的血样;
8. 血液凝固后不宜在4℃放置过久,否则会溶血。
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