查尔酮异构酶( CHI) 试剂盒说明书（分光光度法）

货号：LE-1-189

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

查尔酮异构酶(Chalcone isomerase, CHI)是第一个被认识的黄酮类化合物合成相关酶，也是黄 酮代谢途径中的关键酶之一。查尔酮异构酶和查尔酮合酶一起构成了黄酮类化合物生物合成 的限速酶。

测定原理：

查尔酮异构酶（CHI）催化查尔酮环化形成 4,5,7-三羟基黄烷酮，通过测定 381nm 下的吸光 度变化表示 CHI 的活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、 1mL  玻璃比色皿、研钵、冰和蒸 馏水

试剂的组成：

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存； 用时加入 50mL 试剂一充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保 存。

粗酶液提取：

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液）， 进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 381nm，蒸馏水调零。

2、样本测定表

在 1mL 玻璃比色皿中加入 50µL 上清和 950µL 试剂二，立即混匀并记录 381nm下初始吸光 值 A1 和 37℃保温 30min 后的吸光值 A2。计算 ΔA ＝A2-A1。

CHI 活性计算：

1、按样本蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每小时 A381 变化 0.1 为一个酶活力单位。 

CHI（U/mg prot）=ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.1÷T

=400×ΔA÷Cpr

2、按样本鲜重计算

单位定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每小时 A381 变化 0.1 为一个酶活力单位。 

CHI（U/g  鲜重）=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.1÷T

=400×ΔA÷W

V 反总：反应体系总体积， 1mL； V 样：加入样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体 积， 1 mL； T：反应时间，0.5h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。