蔗糖含量试剂盒说明书（分光光度法）

货号：LE-1-284

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

蔗糖是植物光合作用的主要产物，也是糖分运输和储藏的主要形式。因此， 测定蔗糖含量对 于植物糖代谢具有重要意义。此外， 蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标之一。

测定原理：

先用碱与样品共热，破坏其中的还原糖。然后在酸性条件下将蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖进一步与间苯二酚反应，生成有色物质，在 480nm 下有特征吸收峰。

所需的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、 1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体  100ml×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 3ml×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 40ml×1 瓶，4℃保存；

试剂四：液体  15ml×1 瓶，4℃保存；

试剂五：粉剂 0.5g×1 瓶，常温保存。

蔗糖提取：

称取 0.1~0.2g 样本，常温研碎，加入 1mL 提取液，适当研磨后快速转移到离心管中，置于 80℃水浴锅中 10min，振荡 3~5 次，冷却后，4000g，25℃离心 10min，取上清，加入 2mg 试剂五，80℃脱色 30min，再加入 1mL 提取液，4000g，25℃离心 10min，取上清液测定。

测定操作表（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）：

混匀，沸水浴煮沸5min 左右（盖紧，防止水分散失）

混匀，沸水浴 30min，冷却后 480nm 处蒸馏水调零，空白管、标准管和测定管分别记为 A1、 A2 和 A3。

蔗糖含量计算：

1、按照蛋白质含量计算

蔗糖含量(mg/mg prot)=(C 标准管×V1×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）

= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行测定蛋白浓度。

2、按照样品质量计算

蔗糖含量(mg/g 鲜重)=(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

=2×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。

C 标准管：标准管浓度，1mg/mL；V1：加入样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

注意：最低检测限为 100ng/g 鲜重或 1ng/mg prot