土壤多酚氧化酶（S-PPO）活性检测试剂盒说明书（可见分光光度法）

产品内容：

试剂一：粉剂×2 瓶，临用前每瓶加入 15mL 蒸馏水，用不完的试剂 4℃保存；

试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：乙醚，4℃保存(自备)。

重铬酸钾标准液：液体 10mL×1 瓶，重铬酸钾溶液（2.55mmol/L），相当于 0.1mg/mL 紫色没食子素溶液。

标准品稀释：用 0.5mol/L HCL 溶液将标准液稀释至 0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0mg/mL。

产品说明：

S-PPO 主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放，催化土壤中芳香族化合物氧化成醌，醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，用于土壤环境修复。

S-PPO 能够催化邻苯三酚产生紫色没食子素，后者在 430nm 有特征光吸收。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 比色皿、乙醚（不允许快递）、冰和蒸馏水。

操作步骤：

1、可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 430nm，试剂三调零。

2、标准曲线的建立：取 1mL 稀释好的标准液于比色皿中在 430nm 处测定吸光值 A，根据吸光度（x） 和浓度（y，mg/mL）做出标准曲线。

3、样本测定表

振荡数次，室温静置 30min，取 1mL 上层液于 430nm 处测定吸光值 A。

S-PPO 活性计算：

根据标准曲线，将样品吸光值 A（x）带入公式中，计算出样品浓度 y（mg/mL）。

单位的定义：每天每 g 土样中产生 1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。

S-PPO（U/g土样）＝y×V提取相÷W÷T=840×y      

T：反应时间，1h=1/24d；V 提取相：1.75mL；W：样品质量，0.05g。