土壤脱氢酶活性检测试剂盒说明书（微量法）

测定意义：

土壤脱氢酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤体系内活性微生物量以及其对有机物的降解活性，可以作为土壤微生物的降解性能指标。

测定原理：

氢受体 2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC）在细胞呼吸过程中接受氢以后，被还原为三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），TF 呈现红色，在波长485nm处有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm测定其吸光值，即得土壤脱氢酶活性。

自备实验仪器及用品：

筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、冰、蒸馏水、丙酮（不允许快递，请用户自备）。

试剂的组成和配制：

试剂一：粉剂×1 瓶，使用前加 5mL 水溶解，4℃避光保存（尽量现配现用）。

试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：丙酮，自备。

样品处理：

1. 土壤样品： 准确称取过40目筛的新鲜土壤样品约0.1g（以保证TTC与土壤颗粒充分接触）。

2. 污泥样品：污泥用蒸馏水洗涤，10000g，25℃，离心10min，弃上清，反复3-4次。

测定步骤和操作表：

1、分光光度计/酶标仪预热 0min，调节波长至485nm。

2、操作表

脱氢酶活力计算：

酶活单位定义：

在 37℃时，每克样品每小时使反应体系 OD 值每增加0.01为一个酶活单位。

计算公式：脱氢酶活性（U/g）=A 485 ÷0.01÷T÷W= 16.67×A 485 ÷W

T：培养时间，h；W：样品质量，g

注意事项：

1. 配制好的试剂一避光保存于 4℃，最好在一周内使用，若出现红色，则不能使用。

2. 试剂三易挥发，有毒，为了您的健康，请穿实验服，戴口罩，戴乳胶手套操作。

3. 反应完成后立即冰浴以终止反应，并去除干净残留的反应液。

4. 如果测定出来的吸光值较大，减少样品用量再进行测定。

5. 试剂盒 2-8℃保存。