测定意义

半胱氨酰亚砜裂解酶（CSL）广泛存在于百合科葱属(如大蒜和洋葱)，十字花科芸薹属(如卷心菜，菜花，西兰花)，以及豆科中的合金欢属中，并通常被称为蒜氨酸酶(Alliinase)。香菇酸在γ-谷氨酰转肽酶和半胱氨酸亚砜裂解酶的作用下转化成香菇精，以及产生丙酮酸、乙醛、甲醛和NH3。CSL 是内源性甲醛生成的关键酶之一，测定 CSL 活性对于研究食品安全具有重要意义。

测定原理

CSL 催化 S-甲基-L-半胱氨酸亚砜反应产生丙酮酸，与 2,4-二硝基苯肼反应，在碱性条件下显棕红色，在 510nm 下有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、离心机、分光光度计、1mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃避光保存，临用前加入 2mL 水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存，临用前加入 10mL 水溶解，用不完的试剂分装后-20℃ 保存；

试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂五：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。 

样本处理

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆，4℃浸提 40min。12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定操作

计算公式

标准曲线：y = 1.4626x + 0.0027，R² = 0.9993；x 为标准品浓度：μmol/mL；y 为吸光度△A

1、按蛋白含量计算

C-S lyase 活性（μmol/min/mg prot）=（△A -0.0027）÷ 1.4626×V 样÷(V 样×Cpr )÷T=0.034×（△A-0.0027）÷ Cpr

2、按照样本质量计算

C-S lyase 活性（μmol/min/g 鲜重）=（△A -0.0027）÷ 1.4626×V 样÷(V 样÷V 样总×W )÷T=0.034×（△A-0.0027）÷ W

V 样，加入样本上清体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T，反应时间，0min。

注意事项

1、若测定结果中吸光值超过 2，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。香菇类样本活性较大，可能需要稀释 80-100 倍。