二氢黄酮醇还原酶（DFR）试剂盒说明书(分光光度法)

货号：LE-1-187

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶，在决定植物的花色 、叶色 、果色和其他经济器 官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。

测定原理：

二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素，可与香草醛缩合形成红色化合物，在 500nm 处有特 征吸收峰。

试剂组成和配制

提取液：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 30 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂 ×1 瓶，4℃保存。临用前加 5ml 蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂四：液体 40 mL×2 瓶，4℃避光保存。

自备仪器和用品：

研钵 、低温离心机 、震荡仪 、氮吹仪 、可见分光光度计 、 1ml 玻璃比色皿 、水浴锅 、无水乙醇 、 乙酸 乙酯。

酶液提取：

1、组织：按照组织质量（ g） ：提取液体积(ml)为 1 ：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1g 组织，加入 1ml 提取 液） ，进行冰浴匀浆 。 10000g  ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、液体：直接检测。

测定操作表

酶活性计算公式：

标准曲线：y=0.0184x+0.0002，R²=0.999

1、按照蛋白浓度计算

酶活性定义 ：在 30℃, pH7.5 条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR 活性（mmol/min/mg prot）= (△A-0.0002）÷0.0184×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T÷2 

= 9.06×(△A-0.0002）÷Cpr

2、按照样本质量计算

酶活性定义 ：在 30℃, pH7.5 条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR 活性（mmol/min/g  鲜重）= (△A-0.0002）÷0.0184×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T÷2

= 9.06×(△A-0.0002）÷W

3、按液体体积计算

酶活性定义 ：在 30℃, pH7.5 条件下，每毫升液体每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR 活性（mmol/min/ml）= (△A-0.0002）÷0.0184×V 反总÷V 样÷T÷2 

= 9.06×(△A-0.0002）

V 反总：反应总体积， 1ml；V 样：反应体系中样本体积，0. 1ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；Cpr： 样本蛋白浓度，mg/ml；W ，样本质量，g；T：反应时间，30min