淀粉脱分支酶（DBE）试剂盒说明书（分光光度法 ）

货号：LE-1-087

测定意义

DBE 能够专一性地裂解支链淀粉的α- 1，6 糖苷键， 产生线性的葡萄糖链，在调整支链淀粉 分子的链长方面有重要的作用。

测定原理

采用 3 ，5-二硝基水杨酸法测定 DBE 催化支链淀粉产生的还原糖，通过测定还原糖含量的 变化来计算 DBE 活性。

需自备的的仪器和用品

可见分光光度计、 水浴锅、台式离心机、可调式移液器、 1mL  玻璃比色皿、研钵、冰、  蒸 馏

试剂的组成和配制

提取液： 液体 60mL×1 瓶， 4℃保存；

试剂一： 液体 15mL×1 瓶 ，4℃保存；

试剂二： 粉剂 × 1 支，4℃保存； 临用前每支加入 6mL 试剂一 ，充分混匀后备用； 用不完的 试剂 4℃保存；

试剂三： 液体 12mL×1 瓶， 4℃保存；

试剂四： 液体 35mL×1 瓶 ，4℃保存。

粗酶液提取

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1： 5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）， 进行冰浴匀浆。 15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长到 540 nm，蒸馏水调零。 

2、加样表

混匀， 37℃准确保温 2h

混匀， 95℃水浴 5min，于 1mL 玻璃比色皿 540nm 处读取各管吸光值。  ΔA=A 测定-A 对照。

每个测定管需设个一个对照管。

注意： 可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行 5min 95℃沸水浴处理。 

DBE 活力单位的计算

标准条件测定回归方程为 y= 3.8458x - 0.165；x 为标准品浓度（ mg/mL），y 为吸光值。 

1、按照蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白每 h 催化产生 1mg  葡萄糖定义为一个酶活力单位。

DBE 活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T=0.26 × (ΔA+0.165) ÷Cpr

2、按样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1mg  葡萄糖定义为一个酶活力单位。

DBE 活力(mg /min /g 鲜重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=0.26 × (ΔA+0.165) ÷W

V 反总： 反应体系总体积， 0.4mL；  V 样： 加入样本体积，  0.2mL；V 样总：  加入提取液体 积， 1 mL； T：反应时间，  2 h；Cpr：样本蛋白质浓度， mg/mL；W：样本质量，  g。

标准曲线线性范围为 0.1mg/mL-1mg/mL。

ΔA 线性范围为 0.01-2。