β-葡聚糖含量试剂盒说明书(分光光度法)

货号：LE-1-128

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

β-葡聚糖是由葡萄糖单位组成的多聚糖，它们大多数是通过β-1,3结合，天然存在于真菌、细菌和植物的细胞壁中。

测定原理：

依次使用地衣聚糖酶和β-葡萄糖苷酶水解β-葡聚糖生成葡萄糖，然后使用GOD-POD 试剂测 定葡萄糖的含量。

需自备的仪器和用品：

分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、乙醇和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 75μL×1 瓶，4℃避光保存；临用前加入 1.5mL 试剂一，充分溶解待用，用不 完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

试剂三：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；

试剂四：液体 6mL×1 瓶，4℃保存；

试剂五：粉剂×1瓶，4℃避光保存；临用前加入 3mL 试剂四，充分溶解待用，用不完的试 剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

试剂六：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存；

试剂七：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品测定的准备：

1、燕麦、小麦、纤维等干样：

样本充分烘干粉碎，过 40  目以上筛。取 0.05g 左右样本，加入 1mL 80%乙醇，充分震 荡混匀后，95℃水浴加热 5min 。取出冷却至室温，25℃ 3000g 离心 10min ，去除上清。

沉淀中加入 0.8mL 试剂一，充分震荡混匀，95℃水浴加热 5min 。取出冷却至室温，加 入 50μL 试剂二，混匀后 50℃反应 60min。

反应结束后加入 1mL 试剂三，充分混匀，25℃ 5000g 离心 10min ，取上清待测。

2、发酵液等液体样本：

取 0.5mL 样本，95℃水浴加热 5min 。取出冷却至室温后，分次缓慢加入 0.8mL 95%乙 醇，充分混匀，25℃ 3000g 离心 10min ，去除上清。沉淀中再加入 0.8mL 50%乙醇，混匀后 再次 25℃ 3000g 离心 10min ，去除上清。

沉淀中加入 0.8mL 试剂一，再加入 50μL 试剂二，混匀后 50℃反应 60min。反应结束后 加入 1mL 试剂三，充分混匀，25℃ 5000g 离心 10min ，取上清待测。

测定步骤

1、分光光度计预热 30min ，调节波长至 505nm ，蒸馏水调零。

2、显色液配制：临用前将试剂六和试剂七按 1:1 的比例混合，用多少配多少

3、按下表在 EP 管中加入如下试剂

在 EP 管中加入如下试剂

充分混匀，37℃反应 30min ，转移至 1mL 玻璃比色皿中测定 505nm 处吸光值，记为 A 对照 和 A 测定， △A=A 测定-A 对照。

β-葡聚糖含量计算：

标准条件下测定回归方程为 y = 4.642x + 0.0053 ，R² = 0.9999；x 为标准品浓度（mg/mL）， y 为吸光值。

1、按样本质量计算

β-葡聚糖含量(mg/g  干重)=(ΔA- 0.0053) ÷4.642×V1÷(W ×V2÷V3) 

= 0.797×(ΔA-0.0053) ÷W

2、按样本体积计算

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol  对硝基酚定义为一个酶活力单位。

β-葡聚糖含量(mg/mL)=(ΔA- 0.0053) ÷4.642×V1÷(V4×V2÷V3)

= 1.594×(ΔA-0.0053)

V1：反应总体积，0.2mL；V2：反应体系中样本体积，0. 1 mL；V3:提取液总体积，1.85 mL； V4：液体样本体积，0.5mL；W：样本质量，g。