总胆固醇含量测定试剂盒说明书(分光光度法)

货号：LE-1-146

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

TC 包括游离胆固醇和胆固醇酯 。TC 是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。

测定原理：

利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯转化为 FC； 进一步利用胆固醇氧化酶催化 FC 氧化，生成△4-胆甾烯酮和 H2O2 ；最后利用过氧化物酶催化 H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物；在 500nm 有特征吸收峰，其颜色深浅与 TC 含量成正比。

试剂盒的组成：

试剂一：异丙醇（自备）50ml×1 瓶

试剂二：液体 50ml×1 瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 100μl×1 瓶，4℃保存。

TC 标准品：液体 1ml×1 支 ，0.5μmol/ml，4℃保存。

自备仪器和用品：

可见分光光度计 、水浴锅 、可调式移液枪 、 1ml 玻璃比色皿 、异丙醇和蒸馏水。

TC 的提取：

1 、组织中 TC 的提取：按照组织质量（g） ：试剂一体积(ml)为 1 ：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1g 组织， 加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清，即 TC 待测液。

2 、细胞 、细菌中 TC 的提取：先收集400-500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加 1ml 试剂一 ，超声波 破碎 1min（强度 20％ ，超声 2s，停 1s） ，即 TC 待测液。

3 、血清（浆）等样品：直接测定。

测定操作：

1、分光光度计预热 30 min，调节波长到 500 nm，蒸馏水调零。

2、TC 工作液的配制：临用前，吸取约 0.8ml 试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中，充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中，充分混匀，TC 工作液置于 37℃水浴 10min 。用不完的工作液 4℃保存一周。

3、标准管：依次在 1ml 玻璃比色皿中加入 100μl TC 标准液和 900μl TC 工作液，混匀，37℃静置 3h 后于 500nm 测定 A 标准管。

4、测定管：依次在 1ml 玻璃比色皿中加入 100μl TC 待测液和 900μl TC 工作液，混匀，37℃静置 3h 后于 500nm 测定 A 测定管。

5、空白管：依次在 1ml 玻璃比色皿中加入 100μl  试剂一和 900μl TC 工作液，混匀，37℃静置 3h 后于 500nm 测定 A 测定管。

注意：标准管和空白管只需测定一次。

TC 含量 计算公式：

1、血清（浆） 中 TC 含量：

TC ( μ mol /dL）= C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）×100 

= 50×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）

C 标准液：0.5μmol/ml； 100 ml： 1dL= 100 ml。

2、组织中 TC 含量：

（1）按样本蛋白浓度计算

TC ( μ mol/mg prot）= C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷Cpr 

= 0.5×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷Cpr

（2）按样本质量计算

TC ( μ mol / g 鲜重）= C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W 

= 0.5×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W

C 标准液：0.5μmol/ml；样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g/ml

3、细胞 、细菌中 TC 含量：

TC ( μ mol /10⁴ cell）= C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷细菌或细胞（10⁴ cell /L） 

= 0.5×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷细菌或细胞（10⁴ cell /L）

C 标准液：0.5μmol/ml。

试剂盒最低检出限为 1nmol/ml。