植物叶绿素含量检测试剂盒说明书（分光光度法）

货号：LE-1-241

正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测的意义：

可见分光光度法植物叶绿素广泛存在于绿色植物组织中，其含量与光合作用、营养状况密切相关，是反应植物生长状况的重要指标。

测定原理：

叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有最大吸收，根据经验公式可计算得叶绿素a和叶绿素b 以及总叶绿素含量。

产品内容：

试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、10mL玻璃试管，锡箔纸、无水乙醇、丙酮。

操作步骤：

1、称取约新鲜植物叶片或其它绿色组织，去掉中脉，称取约0.1g，剪碎，用蒸馏水洗干净。

2、提取液的准备：取200mL无水乙醇和400mL丙酮，充分混匀待用。

3、加入1mL蒸馏水，少量试剂一（约10mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入10mL玻璃试管。

4、用提取液冲洗研钵，将所有冲洗液转入玻璃试管，用提取液定容至10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h，观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至其完全变白。

5、取浸提液1mL于1mL玻璃比色皿，提取液调零，测定663nm和645nm处吸光值，分别记为A₆₆₃和A₆₄₅ 。

计算公式：

叶绿素a含量（mg/g）=（12.7×A₆₆₃ – 2.69 ×A₆₄₅）×V提×D÷m÷1000

= 0.01×（12.7×A₆₆₃ – 2.69 ×A₆₄₅）×D÷m

叶绿素b含量（mg/g）=（22.9×A₆₄₅ – 4.68 ×A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000

= 0.01×（22.9×A₆₄₅ – 4.68 ×A₆₆₃）×D÷m

叶绿素总含量（mg/g）=（20.21×A₆₄₅ +8.02 ×A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000

= 0.01×（20.21×A₆₄₅ +8.02 ×A₆₆₃）×D÷m

V提：提取液体积，10mL；D：稀释倍数；m：样本质量，g

注意事项：

1、叶绿素对光敏感，研磨和提取等操作尽量避光或者在弱光下进行。

2、一定要浸提至组织残渣完全变白，否则提取不充分。

3、用提取液冲洗研钵一定要冲洗至所有的绿色物质被转移至玻璃试管。

4、测定时吸光值超过1，可进行适当稀释。