琥珀酸脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒说明书(分光光度法)

货号：LE-1-213

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物 、植物 、微生物和培养细胞中 。SDH 是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一 。此外，为多种原核细胞 产能的呼吸链提供电子。

测定原理：

SDH 催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原 2,6-二氯酚靛酚  （DCPIP） ，并且在 600nm 处具有特征吸收峰，通过 600nm 吸光度的变化，测定 2．6-DPIP 的还原速度， 代表 SDH 酶活性。

产品内容：

试剂一：液体 50mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂二：液体 10mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂三：液体 1mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂四：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；临用前加入到试剂三中溶解待用；

试剂五：粉剂×1 支 ，4℃保存，临用前加入 2ml 蒸馏水，用不完的试剂仍 4℃保存；

试剂六：粉剂×1 支 ，-20℃保存；临用前加入 2ml 蒸馏水，用不完的试剂 4℃保存。

自备仪器和用品：

可见分光光度计 、水浴锅 、 台式离心机 、可调式移液器 、 1 ml 玻璃比色皿 、研钵 、冰和蒸馏水。

样本的前处理：

组织 、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：

1、称取约 0. 1g 组织或收集 500 万细菌或细胞，加入 1ml 试剂一和 10μl  试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2、将匀浆 600g ，4℃离心 5min。

3、弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g ，4℃离心 10min。

4、上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 SDH（此步可选做）。

在步骤④的沉淀中加入 200μl 试剂二和2μl  试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3 秒， 间隔 10 秒，重复 30 次） ，用于线粒体 SDH 活性测定。

测定步骤和加样表：