H2S 含量测定试剂盒说明书（分光光度法）

货号：LE-1-374

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

H2S 是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的  H2S 对神经系统海马的 长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过 程发挥着重要的病理生理效应。

测定原理

H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在 665nm 处有最大吸收峰，通过测定其吸光值可计算 H2S 含量。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 32mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 16mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体 16mL×1 瓶，4℃保存。

试剂五：液体 2.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品处理

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1  的比例（建 议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g ，4℃,离心 10min ，取上清置于冰上待测。

3、血清（浆）：直接测定。

操作表（取 2 mL 离心管，按照下表操作）

H2S 计算公式

标准曲线回归方程为：y = 0.0044x ，R² = 0.9988 

1、组织样品

(1)按照蛋白浓度计算

H2 S（nmol/mg prot）=  ΔA÷0.0044×V 反总÷（V 样×Cpr）=340.9×ΔA÷Cpr

(2)按照样本重量计算

H2S（nmol/g 鲜重）=  ΔA÷0.0044×V 反总÷（V 样÷V样总×W）= 340.9×ΔA÷W

2、液体样品

H2S（nmol/ml）=  ΔA÷0.0044×V 反总÷V 样= 340.9×ΔA

3、细胞

H2S（nmol/10⁴ cell）= ΔA÷0.0044×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量(万个)）

=340.9×ΔA÷细胞数量（万个）

V 反总：反应总体积，0.9mL；V 样：反应中样品体积，0.6mL；V 样总：加入提取液体积， 1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL

注意事项：最低检出限为 1nmol/mL。