产品名称:谷草转氨酶/天冬氨酸氨基转氨酶(GOT/AST)测试盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:LE-1-193,LE-2-193
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
LE-1-193 |
谷草转氨酶/天冬氨酸氨基转氨酶(GOT/AST)测试盒 |
分光光度法 |
50管/24样 |
120 |
LE-2-193 |
谷草转氨酶/天冬氨酸氨基转氨酶(GOT/AST)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
180 |
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
GOT( 2.6.1.1 )广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化可逆转氨基反应,是 氨基酸代谢的重要酶。此外,GOT 在心肌细胞中含量最高,临床上一般常作为心肌梗塞和 心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。
测定原理
GOT 催化 α-同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应,生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸进 一步自行脱羧生成丙酮酸;丙酮酸可与 2,4-二硝基苯肼反应生成 2,4-二硝基苯腙,在碱性条 件下显棕红色;测定 505nm 吸光度的变化,即可计算 GOT 酶活力。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 5mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:液体 6mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂三:液体 60 mL×1 瓶,4℃保存;
样品测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~ 1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提 取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min ,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1 :5~ 10 的比例(建议称取约 0. 1g 组织, 加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min ,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定操作表
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 505nm ,蒸馏水调零。
2、在 EP 管中加入下列试剂
试剂名称 (μL) |
测定管 |
对照管 |
待测样本 |
20 |
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煮沸 10min 的待测样本 |
|
20 |
试剂一 |
100 |
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蒸馏水 |
|
100 |
混匀后,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)准确反应 20min
试剂二 |
100 |
100 |
混匀后,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)准确水浴 20min
试剂三 |
1000 |
1000 |
混匀,室温放置 10min ,在 505nm 波长处,测各管吸光度 A 。 ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。
备注:血清(浆)等样本煮沸过程中可能出现果冻状沉淀,可取消煮沸步骤,直接加入未煮沸 的 10μL 样本。
计算方式
1、标准条件下测定的回归曲线,y = 0.4768x-0.0013(x 为标准品浓度,umol/mL;y 为 Δ A)。
2、血清(浆)GOT 活力的计算
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0013)÷0.4768÷T×103
= 104.9×(ΔA+0.0013)
3、细胞、细菌和组织中GOT 活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0013)÷0.4786×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103
= 104.9×(ΔA+0.0013)÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0013)÷0.4768×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103
= 104.9×(ΔA+0.0013)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT( nmol/min/104 cell) =[(ΔA+0.0013 ) ÷0.4768×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103
=0.21×(ΔA+0.0013)
V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,20min; Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万;103:1umol/mL= 103 nmol/mL。
注意事项:
1、标准曲线线性范围为:0.01 umol/mL -2 umol/mL。
2、ΔA 线性范围为:0.01 -2。
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