脂蛋白酯酶试剂盒说明书(分光光度法)

货号：LE-1-152

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

脂蛋白酯酶是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺细胞及巨噬细胞等实质细胞合成的一种酶，可催化 甘油三脂水解为脂肪酸和单酸甘油酯， 以供组织氧化供能和贮存，并在不同的组织表现出不同的生理意 义。

测定原理

脂蛋白酯酶水解 4-硝基苯棕榈酸酯产生 4-硝基苯酚，在 400nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿。

试剂组成和配制

试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。

样品处理

1、组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为 1 ：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1g ，加入 1mL 试剂一）加入 试剂一，冰浴匀浆后于 4℃ , 10000g 离心 10min ，取上清待测。

2、细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：试剂一体积（mL）为 500~ 1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一）加入试剂一，冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 于 4℃ , 10000g 离心 10min ，取上清待测。

3、血清：直接测定。

测定操作

计算公式

标准曲线：y= 0.0581x -0.0169 ，R²=0.9982

1、按照蛋白浓度计算

酶活性定义：在 45℃ , pH7.5 条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL 活性(μmol /min/mg prot）= (△A+0.0169）÷ 0.0581×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T 

= 17.21×(△A+0.0169）÷Cpr

2、按照样本质量计算

酶活性定义：在 45℃ , pH7.5 条件下，每克组织每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL 活性(μmol /min /g 鲜重）=(△A+0.0169）÷ 0.0581×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T 

= 17.21×(△A+0.0169）÷W

3、按照细胞数量计算

酶活性定义：在 45℃ , pH7.5 条件下，每 10⁴ 个细胞每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL 活性 (μmol /min /10⁴ cell）= (△A+0.0169）÷ 0.0581×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T 

= 17.21×(△A+0.0169）÷细胞数量

4、按照液体体积计算

酶活性定义：在 45℃ , pH7.5 条件下，每毫升血清每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL 活性 (μmol /min /mL）=(△A+0.0169）÷ 0.0581×V 反总÷V 样÷T

= 17.21×(△A+0.0169）

V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0. 1mL；W：样本质量，g；V 样总：加入 提取液体积，1mL；T ：反应时间，10min

注意事项

1、试剂三加入混匀后静置两分钟立即测定，否则影响吸光值。

2、吸光值过高或者测定结果不稳定，则将酶液进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。