蔗糖磷酸合成酶（SPS）试剂盒说明书（分光光度法）

货号：LE-1-289

测定意义

蔗糖不仅是重要的光合产物，也是植物体内运输的主要物质，还是碳水化合物的贮存形式之 一 。SPS（EC 2.4.1.14 ）以果糖-6-磷酸为受体，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成 蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。

测定原理

蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化， 在 480nm 下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。

需自备的的仪器和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、 1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂的组成和配制

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 4mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂二：1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 3mL×1 瓶，4℃保存；

试剂四：液体 40mL×1 瓶，4℃保存；

试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；

样品测定的准备

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1： 5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）， 进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

混匀，25℃准确水浴 10min

沸水浴中煮沸 10min 左右（盖紧，以防止水分散失），冷却

混匀，沸水浴 30min，冷却后， 480nm 下测定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。

SPS 活力单位的计算

1、按照蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg  蔗糖定义为一个酶活力单位。

SPS 活性(μg /min/mg prot)= C 标准管×V1×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白 管)÷(V1×Cpr)÷T

=100×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷Cpr

2、按照样本鲜重计算

单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1μg  蔗糖定义为一个酶活力单位。

SPS 活性(μg/min /g 鲜重) =C 标准管×V1×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白 管)÷(W×V1÷V2)÷T

=100×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷W

C 标准管：标准管浓度， 1000μg/mL；V1 ：加入反应体系中样本体积，0.03mL； V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T ：反应时间：10min。