货号：LE-1-292

测定意义：

蔗糖转化酶(Invertase，Ivr) 催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖 代谢关键酶之一。根据最适 pH ，Ivr 分为酸性转化酶(AI) 和中性转化酶(NI) 两种类型。

AI 的最适 pH 为 3~5 。AI 分为可溶性 AI(S-AI)和细胞壁不溶性 AI (B-AI)两种类型。B-AI  存在于细胞间隙并结合在细胞壁上 ，主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解，以维持库源之间蔗糖的浓度。

测定原理：

B-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物， 在 510nm 有特征光吸收，在一定范围内510nm 光吸收增加速率与 B-AI 活性成正比。

自备用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、  1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液 1：液体 50mL×1 瓶，  4℃保存;

提取液 2：液体 50mL×1 瓶，  4℃保存;

试剂一：液体 50mL×1 瓶，  4℃保存;

试剂二：粉剂 ×1 瓶，  4℃保存；临用前加入 25mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃ 保存;

试剂三：液体 30mL×1 瓶，  4℃保存；

粗酶液提取：

按照组织质量(g)：提取液 1 体积(mL)为 1：5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液 1)，进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，  弃上清，  沉淀中加入 1mL 蒸馏水，充 分震荡混匀，12000g 4℃离心 10min，弃上清，沉淀中加入 1mL 提取液 2  充分混匀，4℃浸提过夜，12000g 4℃离心 20min，取上清置冰上待测 。

测定步骤和加样表：

混匀，37℃准确水浴 30min 后 ，95℃水浴 10min (盖紧，  以防水分散失)，流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)

混匀，95℃水浴 10min  (盖紧，以防止水分散失)，流水冷却后充分混匀，510nm 处，蒸馏水调零， 记录各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)，ΔA=A 测定-A 对照。

B-AI 活性计算：

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.001 ；x 为标准品浓度(μg/mL)，  y 为吸光值。

1、按蛋白浓度计算：

单位的定义：37℃每 mg 蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。

B-AI 活性 (μg/min/mg prot)＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1 ×Cpr )÷T

=20.8 ×(ΔA +0.001) ÷Cpr

2、按鲜重计算：

单位的定义：37℃每 g 组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。

B-AI 活性 (μg/min/g 鲜重)  ＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T

=20.8 ×(ΔA +0.001)÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.2mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。