葡萄糖氧化酶（glucose oxidase ，GOD）试剂盒说明书(分光光度法)

货号：LE-1-166

正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生 H2O2， 是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。

测定原理

GOD 催化产生 H2O2，过氧化物酶催化 H2O2 氧化 4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物， 在 500 nm有特征吸收峰 ，颜色深浅与 GOD 活性成线性关系。

试验中所需的仪器和设备

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、 1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸 馏水

试剂的组成和配制

提取液： 液体 60mL×1 瓶，4℃保存；

缓冲液： 液体 50mL×1 瓶 ，4℃保存；

试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入 20mL 缓冲液充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一个月；

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入 20mL 缓冲液充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一个月；

样品测定的准备

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000： 1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提  取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液）， 进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。

2、试剂一和试剂二的配制：参见试剂的组成和配制。

3、煮沸样本的准备：取 500μL 样本至新的 EP 管中，95℃水浴 10min，冷却至室温后，8000g 4℃离心 10min，取上清作为对照管的煮沸样本待测。

4、测定操作表

混匀，35'C 保温 15min 后，于 500nm波长处读取吸光度。 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。

GOD 活力单位的计算

标准条件下测定回归方程为 y = 2.8348x - 0.0169；x 为 H₂O₂ 标准品浓度(μmol/mL），y 为ΔA。

1、血清（浆）GOD 活力的计算

单位定义： 每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol H₂O₂ 为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/mL）= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷V 样÷T×1000

=58.8×(ΔA+0.0169)

2、细菌、细胞或组织 GOD 活力的计算

（1）按蛋白浓度计算

单位定义： 每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol H₂O₂ 为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷(V 样×Cpr) ×1000÷T 

=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol H₂O₂ 为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/g 鲜重）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷(W×V 样÷V 样总) ×1000÷T 

=58.8×(ΔA+0.0169)÷W

（3）按细菌或细胞密度计算

单位定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol H₂O₂ 为一个酶活力单位。

GOD（nmol/min/10⁴ cell）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)×1000÷T 

=0.118×(ΔA+0.0169)

V 反总：反应体系总体积，0.625mL； V 样：加入样本体积，0.25mL；V 样总：加入提取  液体积 ，1 mL；T：反应时间，15 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g； 500：细菌或细胞总数，500 万。