糖原含量试剂盒说明书(分光光度法) 

货号：LE-1-103

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖，是糖的主要的储存形式之一，主要贮存在肝和肌肉 中作为备用能量，分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度，当血糖升高时可在肝 脏合成糖原，血糖降低时，肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此，肝糖原对维持血糖的 相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时 ，肌糖原不 能直接分解成血糖 ，必须先分解产生乳酸,随血液循环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡 萄糖。

测定原理：

蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原 ，在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。 

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、 1mL  玻璃比色皿、浓硫酸（不允许快递）和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液： 液体 50mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一 ：0.1mg/mL 的葡萄糖标准液  10mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶， 4℃保存；

糖原提取：

1、细胞或细菌：收集 500~1000 万细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；加入 0.75mL 提  取液超声波破碎细菌或细胞（功率 20％或 200W，超声 3s， 间隔 10s，重复 30 次）；转移至  10mL 试管中，95℃水浴 20min（盖紧，防止水分散失），隔 5min 振摇试管 1 次，使充分混  匀 ；取出试管冷却后，用蒸馏水定容到 5ml，混匀 ，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。 

2、组织：称取 0.1~0.2g 样品，加入 0.75ml 提取液充分匀浆；转移至 10ml 试管中；95℃水  浴 20min（盖紧，防止水分散失），隔 5min 振摇试管 1 次，使充分混匀；待组织全部溶解后， 取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5ml，混匀 ，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测 。

步骤和加样表

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 620nm，蒸馏水调零。

2、调节水浴锅至 95℃。

3、试剂二工作液的配制：在试剂二中倒入 10mL 蒸馏水，缓慢倒入 40mL 浓硫酸，充分溶 解混匀后使用；用不完的试剂 4℃保存一周；

4、加样表（在 EP 管中反应）：

混匀，95℃水浴 10min（盖紧，防止水分散失），冷却，于 620nm 波长处 ， 以蒸馏水调零， 分别读取空白管、标准管和测定管吸光度，分别记为 A1 、A2 和 A3。

注意：

1、空白管和标准管只要测一次。

2、如果 A3-A1 大于 2，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。

糖原含量的计算：

1、按照样本质量计算

糖原（mg/g 鲜重）＝1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

= 0.555×(A3-A1)÷ （A2-A1)÷W

2、按照蛋白质含量计算

糖原(mg/mg prot) ＝1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)

=0.111×(A3-A1) ÷ （A2-A1) ÷Cpr

1.11 ：是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数， 即 111ug 糖原用蒽酮试剂显色相当于  100ug  葡萄糖用蒽酮所试剂显示的颜色；C  标准管：标准管浓度，0.1mg/mL；V1：加入反  应体系中糖原提取液体积，0.25mL；V2 ：加入提取液体积，5mL； Cpr：样本蛋白质浓度， mg/mL；W：样本鲜重，g。

注意：最低检测限为 10ng/g 鲜重或 0.1ng/ mg prot。