果胶酶（pectinase）试剂盒说明书(分光光度法)

货号：LE-1-321

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

果胶酶（pectinase）是一类分解果胶质酶类的总称，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖  醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环保、 医药、纺织及日化用品行业。

测定原理

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与DNS 试剂反应生成红棕色物质，在 540nm 有特征吸收峰，测定540nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存； 临用前加入 12.5mL 试剂一 ，50℃加热溶解，用不完的试剂 4℃保存一周。

试剂三：液体 30mL×1 瓶，4℃避光保存。

酶液提取

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。 10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、细菌、真菌：  按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000： 1 的比例（建议500 万细胞加入 1mL 提取液）， 冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）； 然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。

3、细胞培养液等：直接检测。

测定操作表

酶活性计算公式

标准曲线：y = 3.9642x - 0.008；R² = 0.9996；x 为标准品浓度，mg/mL；y 为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

酶活性定义： 在 50℃ , pH3.5 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T 

= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

2、按照样本质量计算

酶活性定义： 在 50℃ , pH3.5 条件下，每克样本每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性（mg/h /g 鲜重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷W

3、按细胞数量计算

酶活性定义： 在 50℃ , pH3.5 条件下，每 10⁴ 细胞每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性（mg/h /10⁴cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量

4、细胞培养液

酶活性定义： 在 50℃ ,  pH3.5 条件下，每毫升培养液每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性（mg/h /mL）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷V 样÷T

=2.523×(ΔA+0.008)

V 反总：反应总体积，0.5mL；V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积， 1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h

注意事项

1、试剂二若有沉淀析出，请置于50℃加热溶解。

2、测定之前请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样 本量，并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。

3、煮沸样本建议在沸水中煮沸 10 分钟，以将酶彻底灭活。