β-葡萄糖醛酸苷酶（β-GD）试剂盒说明书（分光光度法）

货号：LE-1-106

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

β-GD 广泛存在于动物组织中，是一种参与肿瘤侵袭和转移过程的基质降解酶，具有水解固醇葡萄糖 醛酸和酸性粘多糖等生理功能 。该酶在肝细胞中含量较高 。此外在胃癌组织中含量丰富，测定胃液β-GD  活性对于研究胃癌具有重要的意义。

测定原理：

β-GD 催化苯酚  β-D-葡萄糖醛酸产生游离的酚酞，通过测定苯酚含量反应该酶活性高低。

试剂的组成和配制

提取液：液体 60 mL×1 瓶，4℃保存； 

试剂一：液体 5 mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶， -20℃保存；临用前加入 5mL 蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂仍 -20℃保存；

试剂三：液体 37.5mL×1 瓶，4℃保存；

试剂四：1 μmol/mL 标准储备液 10mL ，4℃保存； 

自备仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器 、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

样品测定的前处理

按照组织质量（ g）：提取液体积(ml)为 1 ：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1g 组织，加入 1ml 提取液）， 进行冰浴匀浆 。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在 EP 管中加入下列试剂）

混匀后，37℃水浴 30min

混匀，  540nm 下测定各管吸光值

注意：标准管和空白管只需测一次。

 β-GD 活性计算：

1、按样本鲜重计算：

单位定义：每小时每 g 鲜重样品中催化产生  1μmol 酚酞的量为一个活力单位。

β-GD ( μmol/h/g  鲜重）= (C 标准管×V1)×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷(W×V1÷V2)÷T

=2×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W

2、按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每小时每mg 组织蛋白催化产生  1μmol 酚酞的量为一个活力单位。

β-GD ( μmol/h /mg prot）= (C 标准管×V1)×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷(V1×Cpr)÷T

=2×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷Cpr

C 标准管：标准管浓度，  1μmol/ml；V1：加入样本体积：0.05ml；V2：加入提取液体积， 1ml；T：反应 时间，0.5h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本鲜重，g。