货号：LE-1-244

正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

产品内容：

提取液一：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体35mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加10mL双蒸水充分溶解。（配好后3天内使用完）

试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存。

产品说明：

乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.15）是植物光呼吸代谢中的关键酶，也是光下合成草酸的关键酶，它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。

乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙，在324nm 有特征吸收峰。

自备仪器和用品：

天平、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。

酶液提取

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。12000g， 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定操作

计算公式：

1、按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1 nmol 乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

GO活性（nmol/min /mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=392×ΔA÷Cpr

2、按照样本质量计算

酶活单位定义：每克组织每分钟氧化1 nmol 乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

GO（nmol/min /g）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T= 392×ΔA÷W

ε：乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数：17L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3min

注意事项：

1、测定之前进行预实验，若吸光值较高，请将样品用提取液进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2、色素含量较高的样品，可在提取酶时加活性炭吸附。