产品名称：土壤羟胺还原酶(HR)试剂盒
产品规格：50管/24样,100管/48样
产品货号：LE-1-027,LE-2-027
产品报价：
免费咨询：0551-66107970
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价（元） |
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LE-1-027 |
土壤羟胺还原酶(S-HR)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
750 |
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LE-2-027 |
土壤羟胺还原酶(S-HR)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
1400 |
土壤羟胺还原酶（hydroxylamine reductase,HR）试剂盒说明书(可见分光光度法)
产品内容：
试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 15 mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂五：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂六：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂七：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1 支，4℃保存。临用前加入 1.028mL 蒸馏水，配成 140µmol/mL 的盐酸羟胺标准品。
产品说明：
土壤羟胺还原酶能将土壤中氮代谢过程中形成的中间产物羟胺还原为氨，土壤中的还原态化合物可作为氢的供体，其强弱影响到土壤氮代谢过程中氮素的氨挥发损失，间接影响氮肥的利用效率。
硫酸铁铵中的 Fe3+可将羟胺氧化为氮气，自身被还原为 Fe2+，Fe2+在弱酸条件下与邻菲罗琳形成橙红色配合物，在 510nm 处有吸收峰，羟胺还原酶作用于羟胺，使配合物形成量减少，510nm 处吸光值的减少可反映羟胺还原酶的活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、天平、台式离心机、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、30-50 目筛、漩涡震荡仪、氮吹仪、EP 管、蒸馏水。
操作步骤：
一、样品处理：
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱烘干，过 30-50 目筛。
二、测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 510nm，蒸馏水调零。
2、 将 140µmol/mL 标准液用蒸馏水倍比稀释为 4.375、2.1875、1.094、0.547、0.2735、0.13675µmol/mL的标准溶液备用。
3、 操作表：(在 1.5mL 离心管中依次加入下列试剂)
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对照管 |
测定管 |
无基质管 |
标准管 |
空白管 |
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风干土样（g） |
0.1 |
0.1 |
- |
- |
- |
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试剂一（µL） |
- |
200 |
200 |
- |
- |
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标准溶液（µL） |
- |
- |
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200 |
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蒸馏水（µL） |
200 |
- |
- |
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200 |
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试剂二（µL） |
200 |
200 |
200 |
200 |
200 |
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试剂三（µL） |
600 |
600 |
600 |
600 |
600 |
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混匀后，用 N2 气流排除管中空气，立即密封，于 30℃反应 1h |
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试剂四（µL） |
400 |
400 |
400 |
400 |
400 |
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充分震荡 10min，8000rpm，25℃，离心 10min |
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上清液（µL） |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
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试剂五（µL） |
200 |
200 |
200 |
200 |
200 |
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试剂六（µL） |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
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试剂七（µL） |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
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蒸馏水（µL） |
500 |
500 |
500 |
500 |
500 |
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充分混匀，25℃静置显色 10min，于 1mL 玻璃比色皿中测定 510nm 处吸光值，记为 A 对照管、A 测定管、A 无基质管、A 标准管和 A 空白管。计算△A=（A 无基质管-A 空白管）-（A 测定管-A 对照管），△A 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管，无基质管和空白管需做 1-2次。 |
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三、土壤羟胺还原酶活性计算：
1、 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b， 将△A 带入方程得到 x（µmol/mL）
2、 土壤羟胺还原酶活性的计算：
酶活定义：每克土壤每天转化 1µmol 羟胺为 1 个酶活力单位。
S-HR 活性（U/g 土样）=x×V 试剂一÷W÷T=4.8x÷W。
V 试剂一：加入试剂一体积，0.2mL； W：样本质量，g；T：反应时间 1/24h。
注意事项：
1、土壤表层溶解氧浓度较大，取样应取表层 5cm 以下的土壤，否则酶活性较低或者测定不到。
2、试剂三尽量不要敞口放置，取完立即加盖拧紧。若长期敞口放置，可以沸水浴 10min（盖盖儿） 冷却至常温使用。
3、当△A 大于 0.8 时，建议将样本上清液稀释后再进行测定。
4、反应体系最好能用氮吹仪排除溶解氧，若无此装置，则加入试剂三后立即密封，于 30℃反应 1h。
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