土壤汞( S-Hg)浓度检测试剂盒说明书（可见分光光度法）

测定意义:

土壤汞污染能够通过食物链传递和富集，对植物、动物和人类健康产生威胁。矿山开发、工业加工、农业生产和生活垃圾常常造成土壤汞污染，因此评价和防止土壤重金属污染常常需 要测定土壤汞含量。

测定原理:

土壤经消化后，汞以 Hg²⁺离子形式存在; Hg²⁺ 能与二硫腙生成橙色络合物，溶于三氯甲烷后，在 490nm 测定吸光度， 即可计算 S-Hg 含量。 

自备仪器和用品:

可见分光光度计、 1mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅、可调式移液枪、 100目筛(可更小)、浓硫酸、浓盐酸、浓硝酸、三氯甲烷和蒸馏水。

试剂组成和配制:

标准品: 液体×1支，4 n mol/mL Hg 标准液，4℃保存。

试剂一:  自备 。提供 50mL 空试剂瓶。在该试剂瓶中加入26 mL蒸馏水， 18mL浓盐酸，6 mL 浓硝酸，混匀，4℃避光保存。

试剂二: 粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加 46 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三: 粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加5.5 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂四: 粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加 2.6 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂五: 粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加 13 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂六: 粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加 50 mL 三氯甲烷充分溶解。

S-Hg 测定操作:

1、 分光光度计预热 30 min，调节波长到 490 nm，三氯甲烷调零。

2、 样品管: 风干的土壤，过 100  目筛后精确称取 0.1 g 左右，装入 EP 管;  加入 1 mL 试剂 一，充分混匀后沸水浴消化 60 min。取出冷却后室温 8000g 离心 10min ， 吸取 100 µL 上清液加入新的 EP 管(≥2.5 mL); 再先后加入 900 µ L 蒸馏水和 100 µ L 浓硫酸，混匀; 最后加入 9 00 µ L 试剂二，混匀后 40℃水浴 24h ，期间震荡数次。

3、 标准管: 取 EP 管，加入 100 µ L 标准液，900 µ L 蒸馏水和 100 µ L 浓硫酸，混匀;  最 后加入 900 µ L 试剂二，混匀后 40℃水浴 24h ，期间震荡数次。

4、  于样品管和标准管分别加入 100  µ L 试剂三，震荡至无色; 开盖静置 30min，期间摇荡 数次， 以排出气体。

5、  加入 50 µ L 试剂四，充分混匀后静置 5min; 加入 250µL 试剂五，盖紧后震荡至少 1min， 静置 10min 以分层。

6、  小心吸取 100 µ L 下层溶液，加入 1mL 试剂六，震荡使无色，静置 10 min 以分层。

7、  小心吸取 700 µ L 下层溶液，加入 1mL 玻璃比色皿，于 490nm 处比色，记录各管吸光值。 分别记为 A 样品管和 A 标准管。

注意: 标准管只需测定一次。

S-Hg 浓度计算公式:

S-Hg  ( nmol Hg/g)  = [C 标×A 测定管÷A 标准管]×V 总÷V 样÷W 

= 40×A 测定管÷A 标准管÷W

C 标: 标准液浓度，4 n mol/mL Hg; V 总: 上清液总体积，1 mL; W: 土样质量，g; V 样:加入上清液体积， 100 µ L=0.1 mL。

注意事项:

1、试剂一有刺激性气味， 易挥发，实验过程中应注意佩戴口罩和手套，使用完立即盖好盖 子， 以免试剂不够;

2、测定过程中需加入浓硫酸，加浓硫酸时需注意，避免溅到皮肤或眼睛上;

3、静置分层后，用 1mL 移液枪，排除空气后，轻轻插入下层溶液中，缓慢吸取下层溶液。