组织无机磷含量测定试剂盒说明书(分光光度法) 

货号：LE-1-257

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和 脱磷酸化等等，此外促进碳水化合物的合成、转化和转运。

测定原理：

钼蓝与磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物质，通过测定 660nm 光吸收可计算无机磷含量。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配置：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存 。临用前配制，加入 20 mL 蒸馏水，充分溶解后加入试剂 二（全部），混匀。

标准品：液体×1支， 4℃保存。

无机磷提取：

按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1： 5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。 10000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计预热 30 min，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。

2、打开水浴锅，调节温度到 40℃。

3、空白管：取 EP 管，依次加入 500μL 蒸馏水 ，500μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm测定吸光度，记为 A 空白管。

4、标准管：取 EP 管，依次加入 50μL 标准液 ，450μL 蒸馏水 ，500μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm测定吸光度，记为 A 标准管。

5、测定管：取 EP 管，依次加入 50μL 上清液， 450μL 蒸馏水 ，500μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm测定吸光度，记为 A 测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

组织无机磷含量计算公式：

1、按照蛋白含量计算

无机磷含量(μmol/mg prot)= [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总 ÷Cpr

=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷Cpr

2、按照样本质量计算

无机磷含量(μmol/g )= [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷W 

= 1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W

C 标准液： 1mmol/L；V 总：上清液总体积， 1mL=0.001 L；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样品质量， g。

注意事项：

1、试剂三需临用前配制，并且当天使用完毕。

2、40min 内完成比色。

3、最低检出限为 10 μmol/L。