产品名称:纤维素酶检测试剂盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-B610,YX-W-B610
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B610 |
纤维素酶(CL)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
500 |
YX-W-B610 |
纤维素酶(CL)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
950 |
试剂一:液体 4mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃保存
试剂三:液体 13mL×1 瓶,4℃保存;
标准品:粉剂×1 支,4℃保存,含 10mg 无水葡萄糖(干燥失重<0.2%),临用前加入 1mL 蒸馏水溶解,配制成 10mg/mL 葡萄糖溶液备用,4℃可保存 1 周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。
标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0mg/mL。
操作步骤:
一、样品测定的准备:
1、细菌或细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声冰浴破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3S 秒,间隔 10S,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。8000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
二、加样表和测定步骤:
试剂名称(μL) |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
试剂一 |
50 |
50 |
- |
试剂二 |
200 |
200 |
- |
双蒸水 |
50 |
50 |
- |
样本 |
|
50 |
- |
煮沸的样本 |
50 |
|
- |
混匀,40℃准确水浴 30min,取出后立即放入沸水中煮沸 15min,得糖化液 |
|||
糖化液 |
50 |
50 |
- |
标准液 |
- |
- |
50 |
试剂三 |
150 |
150 |
150 |
混匀, 沸水浴中煮沸显色 15min,冷却 |
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双蒸水 |
1050 |
1050 |
1050 |
标准曲线的建立:540nm 处以标准管 0mg/mL 调零,读标准管吸光值 A。以浓度(y)为纵坐标,吸光度 A(x)为横坐标建立标准曲线。
CL 活力计算:
根据标准曲线,将ΔA 带入公式中(x)计算样品浓度 y(mg/mL)。
1、按照蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL 活力(U /mg prot)=1000×y×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T=233×y÷Cpr
2、按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL 活力(U/g 鲜重)=1000×y×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T =233×y÷W
3、按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。CL 活 力 (U/104 cell)=1000×y×V 反 总 ÷(500×V 样 ÷V 样 总 )÷T =0.467×y 1000:1mg/mL=1000μg/mL;V 反总:反应体系总体积,0.35mL; V 样:加入样本体积,0.05 mL; V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
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