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产品名称:半胱氨酸(Cys)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-197,LE-2-197

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-197

半胱氨酸(Cys)含量测试盒

可见分光光度法

50/48

350

LE-2-197

半胱氨酸(Cys)含量测试盒

微量法

100管/96

650

半胱氨酸(Cys)含量测定试剂盒说明书(可见分光光度法

测定意义:

蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和 Cys。其中,Cys 是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形

成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。

测定原理:

Cys 还原磷钨酸生成钨蓝,在 600nm 处有吸收峰;通过 600nm 吸光度,计算 Cys 含量。

自备仪器和用品:

可见分光光度计、低温离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、磷酸和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体×1 瓶,4℃保存。

标准品:液体×1 瓶,1μmol/mL 标准液,4℃保存。

半胱氨酸提取:

1、 液体样品中半胱氨酸提取:取0.1mL液体样品,加试剂一0.9mL,充分混匀,8000g 4℃离心10min,取上清液,待测。

2、 组织中半胱氨酸提取:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)15~10 的比例(建议称

取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10 min,取上清液待测。

3、 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~10001 的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定操作:

1. 分光光度计预热30min,调节波长到600nm,蒸馏水调零。

2. 空白管:取1mL玻璃比色皿,加入100μL蒸馏水,500μL试剂二,500μL试剂三混匀后室温静置15min,于600nm 处测定吸光值,记为 A 空白管。

3. 标准管:取1mL玻璃比色皿,加入100μL 标准液,500μL试剂二,500μL试剂三,混匀后室温静置 15 min,于 600nm 处测定吸光值,记为 A 标准管。

4. 测定管:取 1mL玻璃比色皿,加入100μL上清液,500μL试剂二,500μL试剂三,混匀后室温静置15min,于600nm处测定吸光值,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需要做一次。

计算公式:

1. 按液体样品的体积计算

半胱氨酸含量(μmol/mL)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×(V 样总÷V 样)=1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)

2. 按样本质量计算:

半胱氨酸含量(μmol/g)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×(V样总÷V样)÷W=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷W

3. 按照蛋白浓度计算:

半胱氨酸含量(μmol /mg prot)= [C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]÷(V样×Cpr)=1×(A测定管-空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr

4. 按细胞数量计算:

氨基酸含量(μmol /104cell)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)] ×(V样总÷V样×细胞数量)=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量

C 标准品:标准品浓度,1μmol/mLV 标准品:反应体系中加入标准品体积,0.1 mLV 样:反应体系中加入样品提取液体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL。W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL。

注意事项:

最低检出限为 100μ mol/L


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