脂肪酶（LPS）活性检测试剂盒说明书（微量法）

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

产品内容：

试剂一：液体 120mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 6mL×1 瓶，室温保存。

试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

标准品：59.3μL×1 支，4℃保存。临用前加入 1.5 mL 无水乙醇配成 125 µmol/mL 的油酸标准溶液，充分溶解。用前注意解冻溶解。

产品说明：

LPS 又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS 广泛的存在于各种生物中。血清中 LPS 的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算 LPS 活性。

试验中所需的仪器和试剂：

研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/酶标板（非聚苯乙烯材质）、可调式移液枪、甲苯、无水乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

组织样品：称取约 0.1g 样品，加试剂一 1.0 mL 充分研磨，于 4℃，15000rpm 离心 30min，取上清液待测。

血清样品：直接检测。

二、测定步骤：

1、 可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 710nm，甲苯调零。

2、 试剂一和试剂二置于 37℃水浴预热 30min 以上。

3、标准溶液的稀释：将 125 µmol/mL 的油酸标准溶液用乙醇稀释为 125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9 µmol/mL 的标准溶液待测。

4、 操作表：

取出离心管，小心吸取上层溶液 0.3 mL，加入另一 2 mL 塑料离心管中，按下表操作：

反复震荡混匀；室温 4000rpm 离心 10 min，小心吸取上层溶液 0.2mL，加入微量玻璃比色皿/酶标板中，于 710nm 处测定吸光值。记为 A 空白管，A 测定管，A 标准管，计算ΔA 测定= A 测管-A 空白管，ΔA 标准= A 标准管-A 空白管

三、LPS 活性计算：

1、 标准曲线的绘制：以油酸标准溶液浓度为横坐标，ΔA 标准为纵坐标，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b。将ΔA 测定带入方程，得到 x（µmol/mL）

2、 酶活计算：

（1）按蛋白浓度计算：

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/mg prot) =x×V 样÷（Cpr×V 样) ÷T= 0.1×x÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/g 鲜重) =x×V 样÷（W×V 样÷V 提) ÷T= 0.1×x÷W

（3）按血清计算：

活性单位定义：37℃中每 mL 血清每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (U/mL 血清) =x÷T= 0.1×x。

V 样：加入反应体系中上清液体积，0.08 mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定， 建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；T：催化反应时间，10 min。W：样本鲜重，g；V 提： 提取液体积，1mL。

注意事项：

1、甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。

2、实验过程中须远离火源。

3、当吸光度大于 1 时，建议将样本稀释后测量。

4、如果用酶标板进行试验，建议选用非聚苯乙烯材质的 96 孔板。