产品名称:脂蛋白酯酶(LPL)测试盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-B415,YX-W-B415
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B415 |
脂蛋白酯酶(LPL)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
400 |
YX-W-B415 |
脂蛋白酯酶(LPL)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
780 |
脂蛋白酯酶(LPL)活性检测试剂盒说明书(可见分光光度法)
注意: 正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
产品简介:
脂蛋白酯酶(Lipoproteinlipase,LPL)是甘油三酯降解的降速酶,可催化甘油三脂水解为脂肪酸和单酸甘油酯,主要在肝脏实质细胞中合成,在脂质代谢和转运中发挥重要作用。
脂蛋白酯酶水解 4-硝基苯棕榈酸酯产生 4-硝基苯酚,在 400nm 有特征吸收峰。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管、冰、丙酮和蒸馏水。
产品内容:
试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 支,4℃避光保存。临用前加入 1.5mL 丙酮溶解备用。
试剂三:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。
标准品:液体 1mL×1 支,5µmol/mL 对硝基苯酚标准溶液,4℃保存。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g 4℃离心 10min, 取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
二、测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 400nm,蒸馏水调零。
2、将 5µmol/mL 标准液用试剂一稀释 16 倍至 0.3125 µmol/mL 的标准溶液备用。
3、操作表:在 1.5mL EP 管中进行下列操作:
样品名称 |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
样品(µL) |
100 |
100 |
- |
|
标准管(µL) |
- |
- |
100 |
|
蒸馏水(µL) |
- |
- |
- |
100 |
试剂一(µL) |
400 |
360 |
400 |
400 |
试剂二(µL) |
- |
40 |
- |
- |
混匀,45℃水浴 10min |
- |
- |
||
试剂三(µL) |
500 |
500 |
500 |
500 |
充分混匀放置 2min 后,对照管和测定管 8000g 常温离心 10min,取上清、标准管和空白管于1mL 玻璃比色皿中测定 400nm 处吸光值,记为 A 对照管、A 测定管、A 空白管、A 标准管,△A=A 测定管- A 对照管,△A 标准=A 标准管- A 空白管。 |
LPL 活性计算
1、血清(浆)LPL 活力计算
单位定义:在 45℃,pH7.5 条件下,每毫升血清每分钟水解产生 1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL(U/mL)=△A÷(△A 标准÷C 标准)÷T×1000=31.25×△A÷△A 标准。
2、组织、细菌或细胞中 LPL 活力计算
1. 按样本鲜重计算
单位定义:在 45℃,pH7.5 条件下,每克组织每分钟水解产生 1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL(U/g 鲜重)=△A÷(△A 标准÷C 标准)×V 提取÷W÷T×1000=31.25×△A÷△A 标准÷W。
2. 按样本蛋白浓度计算
单位定义:在 45℃,pH7.5 条件下,每毫克蛋白每分钟水解产生 1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL(U/mg prot)=△A÷(△A 标准÷C 标准)×V 提取÷(V 提取×Cpr)÷T×1000=31.25×△A÷△A 标准÷Cpr。
3. 按细菌或细胞密度计算:
单位定义:在 45℃,pH7.5 条件下,每 104 个细胞每分钟水解产生 1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL(U/104 cell)=△A÷(△A 标准÷C 标准)×V 提取÷500÷T×1000=0.0625×△A÷△A 标准。
C 标准:标准溶液浓度,0.3125µmol/mL;V 提取:加入试剂一体积,1 mL;T:反应时间,10min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万;1000:单位换算系数,1µmol=1000nmol。
注意事项
1、 测定管加入试剂二后混变浑浊为正常现象。
2、 若 A 大于 1,将粗酶液用试剂一稀释后再进行测定。
3、 标准曲线线性范围为 0.01 -0.625µmol/mL。
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