蔗糖合成酶活性检测试剂盒说明书（可见分光光度法）

注意：正式测定前务必取 2-3  个预期差异较大的样本做预测定。

规格: 50T/24S

产品内容：

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存，

试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 2.5mL 试剂二充分溶解待用，用不完的试剂分装后- 20℃

保存，禁止反复冻融；

试剂四：液体 6mL×1 瓶，4℃保存

标准品：粉剂×1  支，4℃保存， 用时加入 1mL 蒸馏水充分溶解,制备 10mg/mL 葡萄糖标准溶液待用；用不完的试剂 4℃保存一周。

产品说明：

蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4. 1. 13）是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其分解方向 SS- Ⅰ的活性对于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重 要意义。

SS- Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游离果糖和UDPG ，采用3,5 －二硝基水杨酸法测定还原糖的含量来 反映酶活性的高低。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、水浴锅、离心机、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰

操作步骤：

一、样品测定的准备：

1 ．样品的准备：

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1g 组织，加入 1mL 提取液） ，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。

2 ．标准品的制备：

将标准品用蒸馏水稀释至 3 、2 、1.5 、1 、0.5 、0.25 、0mg/mL （0mg/mL 为空白管） 绘制标准曲 线。

二、加样表和测定步骤：

混匀，540nm  蒸馏水调零，测定各管吸光值，ΔA=A  测定-A  对照，每个测定管设一个对照管。标 准曲线的建立： 以标准品的浓度为 x 轴，540nm 下的吸光度(ΔA 标准=A 标准管-A 空白管)为 y

轴，绘制标准曲线。

三、蔗糖合成酶活力计算：

1 、 根据标准曲线，将∆A（y）带入公式中计算出x值（mg/mL）。

2 、 按照蛋白浓度计算

单位定义： 每 mg  组织蛋白每分钟催化生成 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

蔗糖合成酶活力(μg/min/mg prot)=(1000×x×V1）÷(V2×Cpr)÷T

3 、 按样本鲜重计算

单位定义： 每 g  组织每分钟催化生成 1μg 还原糖定义为一个酶活力单位。

蔗糖合成酶活力(μg/min/g  鲜重)= (1000×x×V1）÷(V2×W)÷T

1000：1mg/mL=1000μg/mL； V1：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V2：加入提取液体积，1mL； T：反应 时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。