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产品名称:蔗糖磷酸合成酶(SPS)试剂盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:YX-C-B505,YX-W-B505

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-B505

蔗糖磷酸合成酶(SPS)测试盒

可见分光光度法

50/24

700

YX-W-B505

蔗糖磷酸合成酶(SPS)测试盒

微量法

100/48

1350

蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate synthase,SPS) 试剂盒说明书(微量法

正式测定管前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

规格:100管/48样

测定意义

蔗糖不仅是重要的光合产物,也是植物体内运输的主要物质,还是碳水化合物的贮存形式 之一。SPS(EC 2.4.1.14) 以果糖-6-磷酸为受体,形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形 成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。

测定原理

蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。

需自备的的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰

试剂的组成和配制

提取液: 液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一: 液体 2.5mL×1 瓶,-20℃保存;

试剂二: 1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶,4℃保存;

试剂三: 液体 2mL×1 瓶,4℃保存

试剂四: 液体 25mL×1 瓶,4℃保存;

试剂五: 液体 6mL×1 瓶,4℃保存;

样品测定的准备:

按照组织质量(g) :提取液体积(mL)为1: 5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL 提取液) ,进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。

2、样本测定(在 EP 管中依次加入下列试剂) :

试剂名称(μL)

测定管

对照管

标准管

空白管

样本

10

10

 

 

蒸馏水

 

45

45

55

试剂二

 

 

10

 

试剂一

45

 

 

 

混匀,25℃准确水浴 10min

试剂三

15

15

15

15

沸水浴中煮沸 10min 左右(盖紧,以防止水分散失 冷却

试剂四

210

210

210

210

试剂五

60

60

60

60

混匀,沸水浴30min,冷却后,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,480nm下测定各管吸光值。

标准管和空白管只要做一管。

每个测定管需要设一个对照管

SPS 活力单位的计算

1、按照蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。

SPS 活性(μg /min/mg prot)= {C 标准管×V1× A 测定管-A 对照管 A 标准管-A 空白)) ÷(V1×Cpr)÷T=100× A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr 

2、按照样本鲜重计算

单位定义: g组织每分钟催化产生1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。

SPS 活性(μg /min/g 鲜重) = {C 标准管×V1× A 测定管-A 对照管 A 标准管-A 空白 )) ÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A 测定管-A 对照管 A 标准管-A 空白管)÷W

C 标准管: 标准管浓度,1000μg/mL; V1: 加入反应体系中样本体积,0.01mL; V2: 加入提取液体积,1mL; Cpr: 样本蛋白质浓度,mg/mL; W: 样本鲜重,g; T :反应时间: 10min。

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