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产品名称:山梨醇脱氢酶含量测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-B608,YX-W-B608

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-B608

山梨醇脱氢酶测试盒

紫外分光光度法

50/48

520

YX-W-B608

山梨醇脱氢酶测试盒

微量法

100/96

1000

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定(微量法

测定意义:

SH(EC 1.1.1.14)催化山梨醇脱氢生成果糖,是调控生物体内山梨醇含量的关健酶之一。

测定原理:

SH 催化山梨醇脱氢生成果糖,同时还原 NAD+生成 NADH,测定 340nm 吸光度增加速率可以计算 SH 活性。

自备实验用品及仪器:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 4℃保存; 试剂一:液体 10mL×1 4℃保存; 试剂二:粉剂×1 4℃保存;

粗酶液提取:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量104 个):提取液体积mL) 500~1000:1 的比例建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20% 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 );8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:按照组织质量g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例建议称取约 0.1g 组织,加 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

在试剂二中加入 7.6mL 试剂一和 11.4mL 蒸馏水充分溶解,置于 37℃(哺乳动物) 25℃(其它物种)水浴 5min;用不完的试剂 4℃保存一周;

在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μ L 样本和 190μ L 试剂二,混匀,立即记录340nm 20s 时的吸光值A1  2min20s 后的吸光值 A2,计算 Δ A=A2-A1。

SH 活性计算:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清(浆)SH 活力的计算

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。SH(nmol/min/mL)= [Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109]÷V ÷T=1608×Δ A

2、组织、细菌或细胞中 SDH 活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。SH(nmol/min /mg prot)=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109]÷(V ×Cpr) ÷T=1608×Δ A÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

SHnmol/min /g 鲜重)=[Δ A×V 反总÷(ε  ×d)×109]÷(W× V ÷V 样总) ÷T=1608×Δ A÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。SHnmol/min /104 cell)=[Δ A×V反总÷(ε  ×d)×109]÷(500×V ÷V样总) ÷T=3.216×Δ A V 反总:反应体系总体积2×10-4 L;ε NADH 摩尔消光系数6.22×103 L / mol /cm;d: 比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

b.  96 孔板测定的计算公式如下

1、血清(浆)SH 活力的计算

单位的定义:每毫升血清(浆)每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。SH(nmol/min /mL)= [Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109]÷V ÷T=3216×Δ A

2、组织、细菌或细胞中 SH 活力的计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。SH(nmol/min /mg prot)=[Δ A×V 反总÷(ε ×d)×109]÷(V ×Cpr) ÷T=3216×Δ A÷Cpr

(2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

SHnmol/min /g 鲜重)=[Δ A×V 反总÷(ε  ×d)×109]÷(W× V ÷V 样总) ÷T=3216×Δ A÷W

(3)按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。SHnmol/min /104 cell)=[Δ A×V反总÷(ε  ×d)×109]÷(500×V ÷V样总) ÷T=6.426×Δ A V 反总:反应体系总体积2×10-4 L;ε NADH 摩尔消光系数6.22×103 L / mol /cm;d: 96 孔板光径0.5cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T: 反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数, 500 


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