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产品名称:β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-111,LE-2-111

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-111

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)测试盒

分光光度法

50/24

550

LE-2-111

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)测试盒

微量法

100/48

1050

β-1,3 葡聚糖酶 (β-1,3-GA)试剂盒说明书(分光光度法 

货号:LE-1-111

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

β-1,3-GA(  EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化 β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其 他逆境条件下,可诱导细胞大量合成 β-1,3-GA,因此 β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病 理和逆境生理研究。

测定原理:

β-1,3-GA 水解昆布多糖, 内切 β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率 来计算其酶活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、 水浴锅、可调式移液器、 1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入 3mL 蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂 4℃ 保存;

试剂二:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;

粗酶液提取:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000: 1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL   取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1: 5~10  的比例(建议称取约 0.1g  组织,加入 1mL 提取液), 进行冰浴匀浆。 12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 550nm,蒸馏水调零。

2、样本测定(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):

试剂名称 (μL)

测定管

对照管

样本

100

100

蒸馏水

 

100

试剂一

100

 

充分混匀,放入 37℃水浴 60 min

试剂二

600

600

充分混匀,95℃水浴 5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却,550nm 处记录各管吸光值 A,如果吸光值大于 2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式乘以相应稀释倍数),ΔA=A 测定-A 对照 。

注意:每个测定管需设一个对照管。

β-1,3-GA 活性计算:

1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0958x -0.0192;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。

2血清(浆)β-1,3-GA 活力的计算

β-1,3-GA(mg/h/mL)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷V1=10.438×(ΔA +0.0192) 

3 、细胞、细菌和组织中 β-1,3-GA 活力的计算

1按蛋白浓度计算

单位的定义:每 mg 组织蛋白每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。

β-1,3-GA(mg/h/mg  prot)=[(ΔA +0.0192)÷0.0958 × V1]÷(V1 × Cpr)

=10.438× (ΔA +0.0192) ÷Cpr

2按样本鲜重计算

单位的定义:每 g 组织每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。

β-1,3-GA(mg/h /g  鲜重)=[(ΔA +0.0192)÷0.09585×V1]÷(W×V1÷V2)

=10.438×(ΔA +0.0192) ÷W

3按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。

β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(500×V1÷V2)

=0.0208×(ΔA+0.0192)

V1:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V2 :加入提取液体积, 1mL;Cpr:样本蛋白质浓 度,mg/mL;W:样本鲜重,g; 500 :细菌或细胞总数,500 万。


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