果胶酶活性检测试剂盒说明书（可见分光光度法）

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

产品内容：

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 40mL×1 瓶，4℃保存。若溶液中有不溶解物质，可以 50℃水浴溶解。

试剂二：液体 40mL×1 瓶，4℃避光保存。

标准品：粉剂×1 支，10mg 半乳糖醛酸，4℃保存。临用前加入 0.943mL 蒸馏水，配成 50µmol/mL的标准液。

产品说明：

果胶酶（pectinase）是分解果胶的酶类，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于高等植物果实和微生物中，是水果加工中最重要的酶。

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与 DNS 试剂反应生成在 540nm 有特征吸收峰的棕红色物质，测定 540nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

菌类：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g， 4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

液体：直接检测。

二、测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、将 50µmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为 6、5、4、3、2、1 µmol/mL 的标准溶液备用。

3、取 125µL 样本沸水浴 10min 备用。

4、操作表：(在 1.5mL 离心管中)

三、果胶酶活性计算

1、 标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b， 将△A 带入方程得到 x（µmol/mL）

2、 果胶酶活性的计算：

（1）按蛋白浓度计算

酶活定义：在 50℃，pH3.5 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产生 1µmol 半乳糖醛酸为 1 个酶活力单位。

果胶酶活性（U/mg prot）=x×V 提取÷（V 提取×Cpr）÷T= 2x÷Cpr。

（2）按样本质量计算

酶活定义：在 50℃，pH3.5 条件下，每克样品每小时分解果胶产生 1µmol 半乳糖醛酸为 1 个酶活力单位。

果胶酶活（U/g 鲜重）= x×V 提取÷W÷T=2x÷W。

（3）按照细胞数量计算

酶活定义：在 50℃，pH3.5 条件下，每 104 个细胞每小时分解果胶产生 1µmol 半乳糖醛酸为 1

个酶活力单位。

果胶酶活（U/104 cell）= x×V 提取÷T÷细胞数量（万个）=2x÷细胞数量（万个）。

（4）按液体体积计算

酶活定义：在 50℃，pH3.5 条件下，每 mL 样本每小时分解果胶产生 1µmol 半乳糖醛酸为 1 个酶活力单位。

果胶酶活（U/mL）= x×V 样÷V 样÷T= 2x。

V 提取：提取液体积，1mL； V 样：加入的样品体积，0.125mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；

W：样本质量，g；T：反应时间：0.5h。

注意事项：

1、A 大于 1.5 时，建议将样品用提取液稀释后再进行测定。

2、植物果实组织建议将样本稀释 10 倍或 20 倍后再测定。