多聚半乳糖醛酸酶（ PG）活性检测试剂盒说明书（可见分光光度法）

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

试剂组成和配制

提取液： 液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一： 液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂二： 液体25mL×1瓶，4℃避光保存。 

产品说明：

多聚半乳糖醛酸酶（EC3.2. 1. 15）是一种细胞壁结合蛋白，可以催化果胶分子中α-(1,4)-聚半乳  糖醛酸的裂解，参与果胶的降解，使细胞壁结构解体，导致果实软化， 与果实成熟、叶和花的脱落、 病 原物防御，细胞伸展发育以及木质化有关，在植物抗病性和食品贮藏保鲜领域具有较高的研究价 值。

多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与DNS试剂反应生成红棕色 物质，在540nm有特征吸收峰，测定540nm处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。

操作步骤：

一、酶液提取

1、组织： 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~ 10的比例（建议称取约0. 1g组织，加入1mL 提取液） ，进行冰浴匀浆。16000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。

2、细菌、真菌： 按照细胞数量（104个） ：提取液体积（mL）为500~ 1000：1的比例（建议500万细 胞加入1mL提取液） ，冰浴超声波破碎细胞（功率300w ，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后16000g ，4℃离心10min ，取上清置于冰上待测。

3、培养液： 直接检测。

二、测定操作表

三、酶活性计算公式

标准曲线： y = 0. 1544x - 0. 1537 ，R2 = 0.9996

（1） 按照蛋白浓度计算

酶活性定义： 在 40℃ ，pH6.0 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶 活力单位。

PG 活性（mg/h/mg prot）=（△A+0. 1537）÷0. 1544 ×V 反总÷ （V 样×Cpr）÷T

= 129.53×(△A+0. 1537)÷Cpr

（2） 按照样本质量计算

酶活性定义： 在 40℃ ，pH6.0 条件下，每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶 活力单位。

PG  活性（mg/h /g）= （△A+0. 1537）÷0. 1544×V  反总÷ （V  样×W÷V  样总） ÷T

= 129.53×(△ A+0. 1537)÷W

（3） 按液体体积计算

酶活性定义： 在 40℃ ，pH6.0 条件下，每毫升培养液每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一 个酶活力单位。

PG  活性（mg/h /mL）= （△A+0. 1537）÷0. 1544×V  反总÷V  样÷T

= 129.53×(△A+0. 1537)

（4） 按细胞数量计算

酶活性定义： 在 40℃ ，pH6.0 条件下，每 104 个细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一 个酶活力单位。

PG  活性（mg/h /104cell）=（△A+0. 1537）÷0. 1544×V  反总÷ （V 样×细胞数量÷V  样总） ÷T =129.53×(△ A+0. 1537) ÷  细胞数量

V  反总： 反应总体积， 1mL；V样： 反应中样本体积，0.1mL；V样总： 加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W ，样本质量，g；T：反应时间，0.5h。

注意事项

1、测定之前请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样本量， 并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。

2、煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸 10 分钟，以将酶彻底灭活。