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产品名称:焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFP)试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-C705,YX-W-C705

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-C705

焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFP)测试盒

紫外分光光度法

50管/48样

1200

YX-W-C705

焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFP)测试盒

微量法

100管/96样

2300

焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶PFP)试剂盒说明书(微量法

规格:100 /96 样


注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFP,EC2.7.1.90)是一种胞质酶,广泛存在于植物组织中,催化果糖-6-磷酸与果糖-1,6-二磷酸之间的可逆转化,在光合作用碳代谢中起重要作用。

测定原理

PFP催化6-磷酸果糖转化为 1,6-二磷酸果糖,它在醛缩酶和磷酸丙糖异构酶的作用下转变3-磷酸甘油醛,再由3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH催化生成3-磷酸甘油酸、NAD 和磷酸,340nm 处的吸光度变化反映了 PFP 的活性的高低。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。

试剂组成和配制

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解。

试剂四:液体 0.5mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂五:液体 0.5mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂六:液体 2mL×1 瓶,4℃避光保存。

酶液提取

1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心10min,取上清置冰上待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min); 然后 4℃,10000g 离心 10min,取上清置冰上待测。
3. 液体:直接检测。
测定操作
1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2. 取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入100μ L试剂一,20μ L试剂二,20μ L试剂三,10μ L 试剂四,10μ L试剂五,20μ L试剂六,20μ L粗酶液,充分混匀,记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2,△A=A1-A2
计算公式
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP(nmol/min/mg prot)=Δ A÷(ε ×d)×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=321.54×Δ A÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PFP(nmol/min/g)=Δ A÷(ε ×d)×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.54×Δ A÷W
(3) 按照细胞数量计算
酶活单位定义:每104个细胞每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PFP(nmol/min/104cell)= Δ A÷(ε ×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) ÷T=321.54×Δ A÷细胞数量
(4) 按照液体体积计算
酶活单位定义:每毫升液体每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PFP(nmol/min/mL)=Δ A÷(ε ×d)×V 反总÷V 样÷T=321.54×Δ A
V 反总:反应体系总体积,0.2mL;ε :NADH 摩尔消光系数,6.22×103  L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间, 5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PFP(nmol/min/mg prot)=Δ A÷(ε ×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T= 643.08×Δ A÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
酶活单位定义:每克组织每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PFP(nmol/min/g)=Δ A÷(ε ×d)×V 反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T= 643.08×Δ A÷W
(3) 按照细胞数量计算
酶活单位定义:每104个细胞每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

PFP(nmol/min /104cell)= Δ A÷(ε ×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) ÷T= 643.08×Δ A÷细胞数量
(4) 按照液体体积计算
酶活单位定义:每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

PFP(nmol/min /mL)=Δ A÷(ε ×d)×V 反总÷V 样÷T= 643.08×Δ A
V 反总:反应体系总体积,0.2mL;ε :NADH 摩尔消光系数,6.22×103  L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间, 5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
注意事项:配置好的试剂二、试剂三 3 天内使用完。


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