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产品名称:乙醇酸氧化酶试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-C704,YX-W-C704

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-C704

乙醇酸氧化酶测试盒

紫外分光光度法

50/48

580

YX-W-C704

乙醇酸氧化酶测试盒

微量法

100/96

1100

乙醇酸氧化酶(glycollic oxidase, GO)试剂盒说明书微量法

规格:100管/96样

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.1)是植物光呼吸代谢中的关键酶,也是光下合成草酸的关键酶,它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。

测定原理

乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙,在324nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。

试剂组成和配制

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存,临用前加5mL双蒸水溶解。(配制好3天使用完)

试剂三:液体 2mL×1 支,4℃保存。

酶液提取

按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定操作表

 

测定管

样本(μL

10

试剂一(μL

130

试剂二(μL

40

试剂三(μL

20

充分混匀,立即于微量石英比色皿/96孔板中测定324nm10s190s吸光值A1A2,△A=A2- A1

酶活性计算公式

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

GO 活性(nmol/min/mg prot=A÷ε÷d×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 392×△A÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:每克组织每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

GO 活性(nmol/min /g=A÷ε÷d×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 392×△A÷W

ε:乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数:17L/mmol/cmd:比色皿光径,1cmV 反总:反应总体积,0.2mLV 样:反应中样本体积,0.01mLV 样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW,样本质量,gT:反应时间,3min

b. 96孔板测定的计算公式如下

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

GO 活性(nmol/min /mg prot=A÷ε÷d×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 784×△A÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:每克组织每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

GO 活性(nmol/min/g=A÷ε÷d×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 784×△A÷W

ε:乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数:17L/mmol/cmd:比色皿光径,0.5cmV 反总:反应总体积,0.2mLV 样:反应中样本体积,0.01mLV 样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW,样本质量,gT:反应时间,3min

注意事项

1. 测定之前进行预实验,若吸光值较高,请将样品用提取液进行适当的稀释再测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

2. 色素含量较高的样品,可在提取酶时加活性炭吸附。


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