产品名称:乙醇酸氧化酶试剂盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:YX-C-C704,YX-W-C704
免费咨询:0551-66107970
货号
产品名称
检测方法
规格
售价(元)
YX-C-C704
乙醇酸氧化酶测试盒
紫外分光光度法
50管/48样
580
YX-W-C704
乙醇酸氧化酶测试盒
微量法
100管/96样
1100
乙醇酸氧化酶(glycollic oxidase, GO)试剂盒说明书(微量法)
规格:100管/96样
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.1)是植物光呼吸代谢中的关键酶,也是光下合成草酸的关键酶,它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。
测定原理
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙,在324nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂组成和配制
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存,临用前加5mL双蒸水溶解。(配制好3天使用完)
试剂三:液体 2mL×1 支,4℃保存。
酶液提取
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g, 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定操作表
|
测定管 |
样本(μL) |
10 |
试剂一(μL) |
130 |
试剂二(μL) |
40 |
试剂三(μL) |
20 |
充分混匀,立即于微量石英比色皿/96孔板中测定324nm处10s和190s吸光值A1和A2,△A=A2- A1 |
酶活性计算公式
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO 活性(nmol/min/mg prot)=△A÷ε÷d×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 392×△A÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:每克组织每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO 活性(nmol/min /g)=△A÷ε÷d×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 392×△A÷W
ε:乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数:17L/mmol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样本体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,3min
b. 用96孔板测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO 活性(nmol/min /mg prot)=△A÷ε÷d×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 784×△A÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:每克组织每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO 活性(nmol/min/g)=△A÷ε÷d×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T= 784×△A÷W
ε:乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数:17L/mmol/cm;d:比色皿光径,0.5cm;V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样:反应中样本体积,0.01mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,3min
注意事项
1. 测定之前进行预实验,若吸光值较高,请将样品用提取液进行适当的稀释再测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
2. 色素含量较高的样品,可在提取酶时加活性炭吸附。
相关新闻: |
版权所有 © 合肥莱尔生物科技有限公司 皖ICP备17006278号-2