维生素 B1（VB1）含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法）

注意: 正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

规格: 50T/48S

产品简介：

维生素 B1 （Vitamin B1）又称硫胺素，以辅酶形式参与糖的分解代谢，在生物体能量代谢中有 重要的作用。

VB1 在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾，亚铁氰化钾与 Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝，测定布鲁士蓝在 704nm 下的特征吸收峰，即可反映 VB1 的含量。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管、冰和蒸馏水。

产品内容：

提取液：液体 35mL×1 瓶，4℃保存；

稀释液：液体 60mL×1 瓶， 4℃保存；

试剂一：液体 6mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 7mL×1 瓶，4℃避光保存；

试剂三：液体 6mL×1 瓶，4℃保存；

试剂四：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；

试剂五：液体 8mL×1 瓶，4℃避光保存。

标准品：粉剂×1 支，10mg 维生素B1，4℃避光保存。临用前加入 1mL 稀释液， 配成 10mg/mL （即 10000µg/mL）的标准液。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

组织：将样品磨碎，按照质量（g）： 提取液体积(mL)为1：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1g ，加 入0.6mL 提取液） 加入提取液，60℃浸提 30min ，加蒸馏水 0.4mL ，混匀后于 25℃ ，13000g 离心 10min ，取上清测定（动物组织、豆类种子等蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟或反复离心  2-3 次至上清无浑浊）

细胞：按照细胞数量（104 个）： 提取液体积（mL）为500~ 1000：1 的比例（建议500 万细胞加 入0.6mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w ，超声3 秒， 间隔 7 秒，总时间 3min）； 加蒸馏 水0.4mL ，混匀后于25℃ ，13000g 离心10min ，取上清测定。

液体： 直接检测。

二、测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 704nm ，蒸馏水调零。

2、将10mg/mL（10000µg/mL）标准液用稀释液稀释为 125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9、2µg/mL 的标准溶液备用。

3、操作表： 在 1.5mLEP 管中进行下列操作。

维生素 B1 含量计算

1、标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为x 轴，其对应的△A 标准为y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将△A 带入方程得x（ µg/mL）。

2、维生素 B1 含量的计算：

① 按蛋白浓度计算

VB1 （ µg /mg prot）=x×V 样总÷ （Cpr×V 样总）= x÷Cpr

② 按样本质量计算

VB1 （ µg /g 鲜重）=x×V 样总÷W = x÷W

③ 按照细胞数量计算

VB1（ µg /104 cell）=x×V 样总÷ （细胞数量（万个）=x÷ （细胞数量（万个）

④ 按液体体积计算

VB1（µg/mL）=x

V 总：样本总体积，1mL； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。 

注意事项

1、A大于0.8时，建议将样品用提取液稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2 、蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，豆类种子等建议将样本稀释 20 倍或 40 倍后再测定并在 计算公式中乘以稀释倍数。

3 、显色完成后立即进行测定，若显色完成后有沉淀产生，将其摇匀后测定。

4 、标准曲线线性范围为 0.5- 125µg/mL。