土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒说明书（可见分光光度法）
注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

产品内容：

缓冲液：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃保存，使用前摇匀。

试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。 

标准品：粉剂×1 瓶。5mg N-乙酰氨基葡萄糖，4℃保存。临用前加入 2.27mL 蒸馏水配成10μmol/mL 的标准溶液。

产品说明：

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与 3,5-二硝基水杨酸产生棕红色化合物， 在 540nm 处有特征吸收峰，吸收值增加速率反映了几丁质酶的活性。

需自备的仪器和用品：

天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计、玻璃比色皿，甲苯、蒸馏水。

操作步骤：

一、样品处理

新鲜土样风干，过 40 目筛。

二、测定操作表

1、可见分光光度计预热 30min。波长调至 540nm，蒸馏水调零。

2、将标准溶液稀释为 5、4、3、2、1μmol/mL 的标准溶液备用。

3、在 EP 管中分别加入：

标准曲线的建立：以浓度（y） 为纵坐标，ΔA 标准（x）为横坐标建立标准曲线。

以ΔA 标准为 y 轴，标准溶液浓度为 x 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b。将ΔA 测定带入标准方程中，得到 x（μmol/mL）

酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1μmol N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

几丁质酶活力（U /g 土样）＝ y×V 反总÷W÷T =15.6×y÷W

T：反应时间，1/24d； V 反总：反应体系总体积：0.65mL；W：样品质量，0.1g。