酸性土壤速效磷测试盒说明书（可见分光光度法）

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

产品简介：

速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分，包括全部水溶性磷、部分吸附态磷、易矿化有机态磷以及某些已溶解的沉淀态磷酸盐，土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。

用双酸法提取酸溶性磷和吸附态磷，钼蓝与磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物质，通过测定660nm 光吸收，即可计算磷含量。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、天平、台式离心机、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、20 目筛、漩涡震荡仪、EP 管。

产品内容：

提取液：液体 80mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 15mL 双蒸水，溶解后 4℃保存一周。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 15mL 双蒸水，溶解后 4℃保存一周。

试剂三：液体 15mL×1 瓶，室温保存。

标准品：10μmol/mL 标准磷贮备液 1mL×1 支，4℃保存。

工作液（定磷剂）的配制：按 H₂O：试剂一：试剂二：试剂三=2:1:1:1 的比例配制，配好的工作液应为浅黄色。若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，工作液应现配现用。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

操作步骤：

一、样本处理：

新鲜土样风干，过 20 目筛，按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为 1：10-20 的比例（建议称取约 0.05g 土样，加入 1mL 提取液），振荡提取 1h，10000g，25℃离心 10min，取上清液待测。  

二、测定步骤：

1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 660nm，蒸馏水调零。

2、 将 10μmol/mL 标准液用提取液稀释为 2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125μmol/mL 的标准溶液备用。

3、 操作表：(在 1.5ml 离心管中依次加入下列试剂)

三、速效磷含量计算：

1、 标准曲线的绘制：以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b， 将△A 带入方程得到 x（μmol/mL）。

2、 速效磷含量的计算：

速效磷含量（μmol /g 鲜重）=x×V 样÷（V 样×W÷V 样总）=x÷W。

V 样：加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g。

注意事项

1、 工作液（定磷剂）应现配现用，正常颜色为浅黄色，如有变色或变蓝则均为失效。

2、 此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管或 EP 管等试验器材均要求严格无磷。

3、 显色结束后应立即检测。

4、 当△A 大于 1 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。