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产品名称:蔗糖磷酸化酶(SP)试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-A109,YX-C-A109

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-A109

蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒

紫外分光光度法

50管/48样

1600

YX-W-A109

蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒

微量法

100管/96样

3000

蔗糖磷酸化酶(Sucrose Phosphorylase,SP)试剂盒说明书(紫外分光光度法

规格:50管/48样

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷键,催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相应的葡萄糖基低聚糖。此外,SP还能催化氢醌合成熊果苷,

具有极强的美白效果,在化妆品工业中具有重要应用。

测定原理

SP 能够以磷酸为受体,催化蔗糖产生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为 6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原 NADP +生成 NADPH,导致340nm光吸收值增加。测定340nm吸光度增加速率,即可计算SP活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

缓冲液:液体 40mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 2mL×1 支,4℃保存。

试剂三:液体 1mL×1 支,4℃保存。

试剂四:粉剂 1 瓶,-20℃避光保存,临用前加 5mL 双蒸水溶解。

试剂五:粉剂 1 瓶,-20℃避光保存,临用前加 5mL 双蒸水溶解。

试剂六:粉剂 1 瓶,-20℃避光保存,临用前加 10mL 双蒸水溶解。

试剂七:粉剂 1 瓶,-20℃避光保存,临用前加 10mL 双蒸水溶解。

粗酶液提取

1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建 500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

测定操作表

 

对照管

测定管

缓冲液(μL)

850

650

试剂一(μL)

500

500

试剂二(μL)

30

30

试剂三(μL)

20

20

试剂四(μL)

100

100

试剂五(μL)

100

100

试剂六(μL)

200

200

试剂七(μL)

200

200

混匀,37℃水浴预热 5min

样本(μL)

 

200

迅速混匀,于 1mL 石英比色皿,对照管调零,测定 340nm 的初始值 A 1 ,测定完立即放入

37℃水浴准确反应 2min,迅速测定 340nm 吸光值 A 2 ,△A= A 2 - A 1 。

SP  活性计算公式

1. 按照蛋白浓度计算

酶活定义:37℃,pH6.8 时,每毫克蛋白质每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。

SP 活性(nmol/min/mg prot)=△A÷(e×d)×V 反总÷V 样÷Cpr÷T=804×△A÷Cpr

2. 按照样本质量计算

酶活定义:37℃,pH6.8 时,每克样本每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。

SP 活性(nmol/min/g)=△A÷(e×d)×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T=804×△A÷W

3. 按照细胞数量计算

酶活定义:37℃,pH6.8 时,每104个细胞每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。

SP 活性(nmol/min/104 cell)=△A÷(e×d)×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量(万个))÷T=804×△A÷细胞数量(万个)

e:NADPH 摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应体系总体积,2mL;V 样:反应体系中样本体积,0.2mL;W:样本质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;T:反应时间,2min

注意事项

1. 粉剂-20℃保存,配制好的试剂 3 天内使用完。

2. 可选用 BCA 法测定蛋白含量试剂盒测定蛋白含量。


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