产品名称:酸性蛋白酶试剂盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-B300,YX-W-B300
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B300 |
酸性蛋白酶测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
550 |
YX-W-B300 |
酸性蛋白酶测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
1000 |
规格:100 管/48 样
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
ACP是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。
测定原理:
酸性条件下,ACP催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;钨蓝在680nm有特征吸收峰,通过测定其吸光度增加,来计算ACP活性。
自备实验用品及仪器:
水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、0.5 mL EP管和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 4mL 蒸馏水溶解。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 4mL 试剂一,沸水浴中磁力搅拌溶解。试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 20mL 蒸馏水溶解。
试剂五:液体×1 瓶,4℃保存。
标准品:液体×1 支,0.25μ mol/mL 标准酪氨酸溶液,4℃保存。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即粗酶液。
2. 血清或培养液:直接测定。
3. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500 万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到680nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二、试剂三和试剂四置于30℃水浴保温30min。
3. 对照管:取0.5 mL EP管,加入20μ L粗酶液,40μ L试剂二,混匀后置于30℃水浴保温10min; 加入40μ L试剂三,混匀后8000g,4℃离心10min;取40μ L上清液,加入新的EP管,再加入200μ L试剂四,40μ L试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,取200μ L于微量玻璃比色皿/96孔板,680nm测定光吸收,记为A对照管。
4. 测定管:取0.5mL EP管,加入20μ L粗酶液,40μ L试剂三,混匀后置于30℃水浴保温10min; 加入40μ L试剂二,混匀后8000g,4℃离心10min;取40μ L上清液,加入新的EP管,再加入200μ L试剂四,40μ L试剂五,混匀后置于30℃水浴保温20min,取200μ L于微量玻璃比色皿/96 孔板,于680nm测定光吸收,记为A测定管。(注意与空白管不同,先加试剂三,后加试剂二)
5. 空白管:取0.5mL EP管,加入40μ L蒸馏水,200μ L试剂四,40μ L试剂五,混匀后置于30℃ 水浴保温20min,取200μ L于微量玻璃比色皿/96孔板,于680nm测定光吸收,记为A空白管。
6. 标准管:取0.5mL EP管,加入40μ L标准品,200μ L试剂四,40μ L试剂五,混匀后置于30℃ 水浴保温20min,取200μ L于微量玻璃比色皿/96孔板,于680nm测定光吸收,记为A标准管。
ACP 活性计算公式:
使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按照蛋白浓度计算
ACP 活性单位定义:30℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性(nmol/min/mg prot)= C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×稀释倍数÷(Cpr×V1)÷T= 3125×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
(2)按照样本质量计算
ACP 活性单位定义:30℃每克样品每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性(nmol/min/g)=C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)× 稀释倍数÷(W×V1÷V2)÷T=3125×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
(3)按照液体体积计算
ACP 活性单位定义:30℃每毫升样品每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性(nmol/min/mL)=C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×稀释倍数÷V1÷T=3125×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
(4)按照细胞数量计算
ACP 活性单位定义:30℃每 104个细胞每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性(nmol/min/104cell)=C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×稀释倍数÷(细胞数量×V1÷V2)÷T = 3125×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷细胞数量
C 标准品:0.25 μ mol/mL 标准酪氨酸溶液;稀释倍数:(20+40+40)÷40=2.5;Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),注意该粗酶液不能直接用于蛋白质含量测定,需要另外测定;建议称取同样质量的样品,加入 1mL 蒸馏水匀浆提取离心后,用本公司蛋白质含量测定试剂盒测定;W:样品质量(g);V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),20μ L=2×10 -2 mL;V2:粗酶液总体积(mL),1mL;T:催化反应时间(min),10min。
使用96孔板测定的计算公式如下
(1)按照蛋白浓度计算
ACP 活性单位定义:30℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性(nmol/min/mg prot)= C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×稀释倍数÷(Cpr×V1)÷T= 3125×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
(2)按照样本质量计算
ACP 活性单位定义:30℃每克样品每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性(nmol/min/g)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)× 稀释倍数÷(W×V1÷V2)÷T=3125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
(3)按照液体体积计算
ACP 活性单位定义:30℃每毫升样品每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性(nmol/min/mL)=C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×稀释倍数÷V1÷T=3125×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
(4)按照细胞数量计算
ACP 活性单位定义:30℃每104个细胞每分钟催化水解产生1nmol酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性(nmol/min/10 4 cell)=C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×稀释倍数÷(细胞数量×V1÷V2)÷T = 3125×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷细胞数量
C 标准品:0.25μ mol/mL 标准酪氨酸溶液;稀释倍数:(20+40+40)÷40=2.5;Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),注意该粗酶液不能直接用于蛋白质含量测定,需要另外测定;建议称取同样质量的样品,加入1mL 蒸馏水匀浆提取离心后,用本公司蛋白质含量测定试剂盒测定; W:样品质量(g);V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),20μ L=2×10 -2 mL;V2:粗酶液总体积(mL),1mL;T:催化反应时间(min),10min。
注意事项:
临用前配制的试剂配置好后3天内使用完毕。
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