产品名称:乳酸(LA)含量测试盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-B206,YX-C-B206
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B206 |
乳酸(LA)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
650 |
YX-W-B206 |
乳酸(LA)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
1280 |
乳酸(LA)含量检测试剂盒说明书(可见分光光度法)
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
产品内容:
提取液:液体30mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存。临用前加入1.5ml试剂一充分溶解。可分装后-20℃保存,避免反复冻融;
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加入15mL试剂一充分溶解;可分装后-20℃保存,避免反复冻融;
试剂四:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前每瓶加入15mL试剂一混匀,可分装后-20℃保存,避免反复冻融;
试剂五:液体7.5mL×1瓶,4℃保存。
标准品:粉剂×1支,4℃保存。临用前加入1.04mL提取液配成100µmol/mL的标准溶液;
显色液的配制:临用前根据用量按照试剂三(V):试剂四(V):试剂五(V)=1:1:0.5的比例充分混匀,现配现用;
产品说明:
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物,与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关,乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸,同时使NAD+还原生成NADH和H+,H+传递给PMS生成的PMSH2还原特异性底物,在450nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵/匀浆器、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿、恒温水浴锅、乙醇和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理:
a. 组织:按照质量(g):提取液一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,12000g离心10min后取上清待测。
b. 细胞:按照细胞数量(106个):提取液一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);于4℃,12000g离心10min后取上清待测。
c. 血清(浆):取100µL血清(浆)加入0.9mL提取液,4℃12000g离心10min后取上清待测。
二、测定操作
1、分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至450nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2、标准液的稀释:将100µmol/mL的标准溶液用蒸馏水稀释为10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0µmol/mL的标准溶液待测。
3、加样表:
|
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
样品(µL) |
50 |
50 |
- |
- |
标准品(µL) |
- |
- |
50 |
- |
蒸馏水(µL) |
- |
50 |
- |
50 |
试剂一(µL) |
200 |
200 |
200 |
200 |
试剂二(µL) |
50 |
- |
50 |
50 |
工作液(µL) |
700 |
700 |
700 |
700 |
于37℃准确反应30min。于450nm处测定吸光值,分别记为A测定管,A对照管,A标准管,A空白管,计算∆A测定=A测定管-A对照管;∆A标准=A标准管-A空白管。 |
三、乳酸含量的计算:
1、标准曲线的绘制
以各标准溶液浓度为x轴,以其对应的吸光值(∆A标准)为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程
y=kx+b,将∆A测定带入公式中得到x(µmol/mL)。2、乳酸含量计算
(1) 按照蛋白含量计算
LA含量(µmol/mgprot)=x×V样÷V样÷Cpr=x÷Cpr
(2) 按照样本质量计算
LA含量(µmol/g鲜重)=x×V样÷(V样÷V样总×W)=x÷W。
(3) 按照细胞数量计算
LA含量(µmol/106cell)=x×V样÷(V样÷V样总×细胞数量)=x÷细胞数量
(4) 按照液体体积计算
LA含量(µmol/mL)=10×x。
V样品:加入的样品体积,0.05mL。:W:样本质量,g/mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL,蛋白浓度需自行测定;V提取液:加入的提取液体积,1mL;细胞数量,5×106个
注意事项:
1.若测定吸光值∆A大于最大浓度标准品OD值,请将样品体积进行适当的稀释后再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数
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