产品名称:丙酮酸脱氢酶(PDH)测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:YX-C-B103,YX-C-B103
免费咨询:0551-66107970
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B103 |
丙酮酸脱氢酶(PDH)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/48样 |
720 |
YX-W-B103 |
丙酮酸脱氢酶(PDH)测试盒 |
微量法 |
100管/96样 |
1400 |
丙酮酸脱氢酶(PDH)活性检测试剂盒说明书(可见分光光度法)
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品内容:
试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 1mL×1 支,-20℃避光保存;
试剂三:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1 支,4℃保存;
试剂五:粉剂×1 支,-20℃保存;
试剂六:粉剂×1 支,4℃保存;
试剂七:粉剂×1 支,4℃保存;
工作液的配制:临用前把试剂四、五、六、七转移到试剂三中混合溶解待用;用不完的试剂4℃ 保存一周。
产品说明:
PDH(EC 4.1.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶,催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循环连接起来。
PDH 催化丙酮酸脱氢,同时还原2,6-二氯酚靛酚(2,6-DCPIP),从而导致605nm 光吸收的减少。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本的处理
称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10µL 试剂二,用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨,4 ℃ 11000 g 离心 10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 605nm,蒸馏水调零。
2、每个样本需要900µL 工作液,按样本数加一取出一定量的工作液于37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)中孵育5min。
3、空白管:在1mL 比色皿中加入 900 µL 工作液和50µL 水,混匀,立即记录605nm 处初始吸光值A1 和 1min 后的吸光值 A2,计算 ∆A 空白=A1-A2。
4、测定管:在 1mL 比色皿中加入 900 µL 工作液和50µL 样本,混匀,立即记录 605nm 处初始吸光值A3 和1min 后的吸光值A4,计算∆A 测定=A3-A4。
三、PDH 活性计算
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。PDH 活性(U /mg prot)=[(∆A 测定-∆A 空白)×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T=904.762×(∆A 测定-∆A 空白)÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。PDH 活性(U/g 鲜重)=[(∆A 测定-∆A 空白)×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=913.81×(∆A 测定-∆A 空白)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。PDH 活性(U/104 cell)=[(∆A 测定-∆A 空白)×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=1.828×(∆A 测定-∆A 空白)
V 反总:反应体系总体积,9.5×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104 L / mol /cm; d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.05 mL;V 样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01 mL; T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数, 500 万。
注意事项:
1、测定过程中所有样本在冰上放置,以免变性和失活。
2、测定管的∆A 值在 0.01-0.25 之间,若测定管的∆A 值大于 0.25,需将样本进行稀释。
3、由于提取液中含有一定浓度的蛋白(约1mg/mL),所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
相关新闻: |
版权所有 © 合肥莱尔生物科技有限公司 皖ICP备17006278号-2