BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书(分光光度法)

货号：LE-1-371

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定确保蛋白浓度在 20-2000μg/ml 内。

测定意义

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理

碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将 Cu2+还原成 Cu+； 2 分子的 BCA 与 Cu+结合，生成紫色络合物，在 40-595nm 有吸收峰，562nm 处吸收峰最强。

自备仪器和用品

台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂 A：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂 B：液体 1mL×1 支，4℃保存。

标准蛋白：0.5mg/ml液体×1 支，4℃保存。

工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×1mL），将试剂 A 和 B 按照 50：1 的比例混合，盖紧后充分混匀。

样品中可溶性蛋白质提取

1、液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。

2、组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释）

3、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

测定操作

1、分光光度计预热 30min，调节波长到 562nm，蒸馏水调零。

2、工作液置于 60℃水浴预热 30min。

注意：空白管和标准管只需要做一次。

计算公式

Cpr (mg/mL)= C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）

=0.5×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）

注意事项

1、BCA 法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在 20-2000μg/ml 样品。测定前取 1-2 个样做预实验，样品蛋白含量太高的话，请稀释至相应浓度范围内，以确保测定的准确性。

2、待测样品蛋白提取可用生理盐水、蒸馏水或 PBS 提取；

3、由于受测定温度及时间等的影响，建议严格按照给定条件测定，即 60℃水浴保温 30min。