主要用途

组织琥珀酸-细胞色素C还原酶活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用底物琥珀酸， 通过反应系统测定样品中细胞色素C还原后峰值的增高，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种组织（动物、人体等）裂解悬液样品中琥珀酸-细胞色素C还原酶的特异性活性检测。可用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。

技术背景

琥珀酸-细胞色素C还原酶（succinate cytochrome C reductase）是线粒体呼吸链的超级复合物（super complex），由线粒体呼吸链复合物II，通常称为琥珀酸－辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶（SQR；Succinate-Coenzyme Q Reductase；Succinate Dehydrogenase），和线粒体呼吸链复合物III，通常称为辅酶Q－细胞色素C还原酶、细胞色素还原酶或bc1复合物（QCR；ubiquinol cytochrome c oxidoreductase；cytochrome reductase；bc1 complex）等构成，调节电子由琥珀酸转移到细胞色素C上。其中SQR是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体：含有四个亚单位，包括共价结合的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide；FAD）和三个铁硫中心（Fe-S clusters），以及细胞色素b₅₆₀亚单位；QCR是线粒体电子传递链的中心元素：含有十一个亚单位，包括细胞色素b_L（b₅₆₆）、b_H（b₅₆₂），细胞色素c1（cytochrome c1）和Rieske铁硫蛋白（Rieske iron-sulfur protein；RISP）。该复合物异常会导致嗜铬细胞瘤（paraganglioma）、肾上腺嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma）、Leigh综合征，以及心肌疾病。基于琥珀酸底物，通过琥珀酸-细胞色素C还原酶的催化，氧化为富马酸，同时氧化型细胞色素C，转化为还原型细胞色素C，在分光光度仪下产生吸光峰值的变化（550nm 波长），由此定量测定琥珀酸-细胞色素C还原酶的特异活性。其反应系统是：

产品内容

GENMED清理液（Reagent A）  毫升

GENMED裂解液（Reagent B）  毫升

GENMED缓冲液（Reagent C）  毫升

GENMED反应液（Reagent D）  毫升

GENMED阴性液（Reagent E）    毫升

GENMED底物液（Reagent F）  微升

产品说明书     1份

保存方式

保存GENMED清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；GENMED底物液（Reagent F），避免光照，有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于反应液和样品制备的容器

15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器

（微型）台式离心机：用于样品操作

比色皿：用于比色的容器

分光光度仪：用于比色分析

培养箱：用于孵育反应物

实验步骤

一、 样品准备

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量 

2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管

3． （选择步骤）加入适量的（500毫克组织需要3毫升）GENMED清理液（Reagent A）清洗1次

4． 移入到一个液氮冻存管

5． 即刻放进液氮罐过夜

6． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）

7． 放进一个15毫升锥形离心管

8． 加入预冷的xx微升GENMED裂解液（Reagent B） 

9． 转移到预冷的1.5毫升离心管

10． 强力涡旋震荡30秒，充分混匀

11． 置于冰槽里孵育30分钟，期间每10分钟强力涡旋震荡30秒（注意：如需暂时停止，放进－70℃冰箱里储存备用）

12． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

13． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管

14． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）

15． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

一、 测定准备

1． 准备好待测样品（例如组织裂解样品等），置于冰槽里 

2． 设定好分光光度仪（温度为30℃）：波长为550nm，间隔60秒，读数6次（共5分钟），并置零

3． 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；GENMED缓冲液（Reagent C）室温预热；GENMED底物液（Reagent F）注意避光。然后进行下列操作。

二、 背景对照测定

1． 移取xx微升GENMED缓冲液（Reagent C）到新的比色皿

2． 加入xx微升GENMED反应液（Reagent D）

3． 加入xx微升GENMED底物液（Reagent F）

4． 上下倾倒数次，混匀

5． 放进30℃培养箱里静置3分钟

6． 加入xx微升GENMED阴性液（Reagent E）

7． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）

8． 即刻放入分光光度仪检测，此为背景空对照：550波长读数0分钟－550波长读数1分钟或5分钟 

三、 样品活性测定

1． 移取xx微升GENMED缓冲液（Reagent C）到新的比色皿

2． 加入xx微升GENMED反应液（Reagent D）

3． 加入xx微升GENMED底物液（Reagent F）

4． 上下倾倒数次，混匀

5． 放进30℃培养箱里静置3分钟

6． 加入100微升待测样品（注意：50微克总蛋白）

7． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）

8． 即刻放入分光光度仪检测，此为样品活性读数：550波长读数0分钟－550波长读数1分钟或5分钟

四、 计算样品活性

注意事项

1． 本产品为21次操作，包括背景对照

2． 操作时，须戴手套

3． GENMED缓冲液（Reagent C）含有毒性物质，避免直接用手接触

4． 系统操作过程中，背景测定只需1次

5． 加入样品启动反应后3秒内即刻比色测定

6． 测定值由低到高变化；测定可以持续5分钟

7． 1分钟或5分钟测定读数高于0分钟测定读数，表明有酶活性

8． 比色测定后，比色皿须清洗彻底

9． 建议待测样本线粒体蛋白浓度为50微克/100微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量；注意计算公式的调整（本公司提供GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒GMS30030.1）

10． 琥珀酸-细胞色素C还原酶单位活性定义为：在30℃，pH 7.5条件下，每分钟内能够还原1微摩尔细胞色素C所需的酶量作为一个活性单位

11． 本公司提供系列线粒体及其酶类技术产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测准确

使用承诺

 秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号 名称 规格

GMS50687.2 GENMED组织琥珀酸-细胞色素C还原酶活性比色法定量检测试剂盒 20次

GMS50687.2A GENMED清理液（Reagent A）     毫升

GMS50687.2B GENMED裂解液（Reagent B）      毫升

GMS50687.2C GENMED缓冲液（Reagent C）     毫升

GMS50687.2D  GENMED反应液（Reagent D）      毫升

GMS50687.2E  GENMED阴性液（Reagent E）      毫升

GMS50687.2F GENMED底物液（Reagent F） 毫升

GMS30030.1 GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒 100次

试剂盒订购信息