货号：LE-1-392

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

高铁还原酶（ferric-chelate  reductase,FCR）催化高价铁螯合物中的  Fe³⁺ 还原为  Fe²⁺ ，在部分物种铁元素的吸收中有重要作用。

测定原理：

FCR 催化  Fe³⁺ 还原为  Fe²⁺ ， Fe²⁺ 和 ferrozine 反应显色，在 562nm 下有特征吸光值。

自备用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存;

试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存;

试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

按照组织质量（g）：水 mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 蒸馏水）， 进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 562nm ，蒸馏水调零。

2、工作液配制：将试剂一、二、三以 1:1:1 的比例混合。临用前配制，用多少配多少。

3、在 1mL 玻璃比色皿中，加入 250μL 样本上清和750μL 工作液，混匀，记录初始吸光值 A1 和 30min 后的吸光值 A2 。ΔA=A2-A1。FCR 活性计算公式：

标准曲线：y = 8.0014x + 0.0011 ，R² = 0.9997；

1、按样本质量计算

单位定义：每 g 样本每分钟产生 1nmol  Fe²⁺ -ferrozine 定义为一个酶活力单位。

FCR（nmol/min/g  鲜重）= (△A-0.0011）÷8.0014×1000×V 标÷(V 样÷V 样总×W)÷T = 4.166×(△A-0.0011）÷W

2、按样本蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 蛋白每分钟产生 1nmol  Fe²⁺ -ferrozine 定义为一个酶活力单位。

FCR（nmol/min/mg prot）= (△A-0.0011）÷8.0014×1000×V 标÷(V 样÷V 样总×Cpr)÷T =4.166×(△A-0.0011）÷Cpr

V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，250μL；V 标：加入标准品体积 ， 250μL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；1000，μmol  到 nmol 的转换系数。