1 原理及用途

黄曲霉毒素是由黄曲霉菌属的黄曲霉和寄生曲霉等产生的次级代谢产物，主要污染玉米、花生、坚果等。黄曲霉毒素以 AFB1、AFB2、AFG1 和 AFG2 这四种毒素为主，黄曲霉毒素总量一般是指这四种毒素的总量。它们是 I 类致癌物，被证明对人和动物的肝脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害，是一类毒性很强的致癌物质。

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测谷物、花生、饲料等样品中的黄曲霉毒素，试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的黄曲霉毒素和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗黄曲霉毒素抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中黄曲霉毒素的残留量。

2 技术指标

2.1 试剂盒灵敏度：0.02ppb(ng/ml)

2.2 反应模式：25℃，30min～15min

2.3 检测下限：

谷物……………………………………0.1ppb

饲料……………………………………0.2ppb

2.4 交叉反应率：

黄曲霉毒素B1…………………………100%

黄曲霉毒素B2…………………………80%

黄曲霉毒素G1…………………………75%

黄曲霉毒素G2…………………………45%

黄曲霉毒素M1…………………………8%

2.5 样本回收率：

谷物及配合饲料……………………85%±15%

3 试剂盒组成

酶标板……………………………96孔

标准液（黑盖）：各1ml

0ppb、0.02ppb、0.04ppb、0.08ppb、0.16ppb、0.32ppb

高标准液：100ppb …………………1ml

酶标记物（红盖） …………………5.5ml

抗体工作液（蓝盖） ………………5.5ml

底物液A（白盖）……………………6ml

底物液B（黑盖）……………………6ml

终止液（黄盖）………………………6ml

20×浓缩洗涤液（白盖）……………40ml

说明书…………………………………1份

盖板膜…………………………………1张

自封袋…………………………………1个

4 需要的器材和试剂

4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 试剂：甲醇

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知：

实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液：

配液1：样本提取液

70%甲醇，即V甲醇:V去离子水=7：3。

配液2：工作洗涤液

将浓缩洗涤液20倍稀释(1份洗涤液加19份去离子水)。

5.3 样本前处理步骤：

5.3.1 谷物处理方法 

1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加5ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去离子水，混匀；

3）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：5    检测下限：0.1ppb

5.3.2 配合饲料处理方法 

1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加10ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去离子水，混匀；

3）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：10    检测下限：0.2ppb（若样本中黄曲霉毒素含量较高，可取2）步骤中已混匀的液体，以35%甲醇进行稀释，此时样本稀释倍数则为实际稀释倍数。例如：取2）步骤中液体以35%甲醇10倍稀释，实际稀释倍数为10×10=100，检测下限：2ppb）