游离脂肪酸（FFA）含量试剂盒(测植物组织)(分光光度法)

注意事项：本试剂盒用于测定植物组织样品，如需测定血清、动物组织、微生物、细胞等样品，请查询货号 LE-1-061/LE-2-061

货号：LE-1-137

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

FFA 既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。FFA 的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关， 也可反映食物贮藏中的品质变化。

测定原理：

在弱酸性条件下，FFA 与铜盐反应生成铜皂，在 715nm 处有特征吸收峰，在一定范围内游离脂肪酸含 量与显色程度呈线性关系。

试剂组成和配置：

试剂一 ：液体 60 ml ×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 25 ml ×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 25 ml ×1 瓶，4℃保存。

自备仪器和用品：

研钵、 台式离心机、震荡仪、可见分光光度计、1ml 玻璃比色皿。

样品中 FFA 提取：

组织用蒸馏水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，捣碎后按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~ 12 的比例（建议称取约 0. 1g 组织，加入 1.2ml 试剂一）加入试剂一 ，震荡提取 3h，8000g，4℃离心 10min， 取上清液待测。

测定操作：

1、分光光度计预热 30 min，调节波长到 715 nm。

2、对照管：取上清液 1ml，加 0.5ml 试剂二，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层 0.8ml 于 1ml 玻璃比 色皿，调零。

3、测定管：取上清液 1ml，加 0.5ml 试剂三，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层 0.8ml 于 1ml 玻璃比 色皿，测定吸光值，记为 A。

注意 ：对照管每个样品都需要测定一次。

FFA 含量计算公式：

标准曲线：y=0.0075 x+ 0.0055，R²=0.994

1、按样本蛋白浓度计算

FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1×Cpr)

=133×(A-0.0055)÷Cpr

2、按样本质量计算

FFA（nmol/g  鲜重）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1÷V2×W)

=160×(A-0.0055)÷W

V1：加入样本体积， 1ml；V2：提取液体积， 1.2ml；  Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样品质量，g。

注意事项：

1、蛋白含量不可直接用提取的上清液直接测定，可用蒸馏水或缓冲液或生理盐水选用本公司的 BCA 法蛋白含量测定试剂盒。

2、试剂盒最低检出限为 2 nmol/ml。