产品名称：异柠檬酸裂解酶(ICL)试剂盒
产品规格：50管/48样,100管/96样
产品货号：LE-1-390,LE-2-390
产品报价：
免费咨询：0551-66107970
|
货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价（元） |
|
LE-1-390 |
异柠檬酸裂解酶（ICL)测试盒 |
分光光度法 |
50管/48样 |
800 |
|
LE-2-390 |
异柠檬酸裂解酶（ICL)测试盒 |
微量法 |
100管/96样 |
1500 |
异柠檬酸裂解酶（ICL）活性检测试剂盒说明书（分光光度法）
货号：LE-1-390
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
ICL（EC4.1.3.1）主要存在于植物和微生物中，油料作物种子在萌发过程中，通过乙醛酸循环及其他 过程将脂肪转变成碳水化合物 。ICL 是乙醛酸循环的关键酶之一。
测定原理：
ICL 催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和 NADH 在 LDH 的作用下生成乙醇和NAD，NADH 在 340nm 下有特征吸收峰，监测 340nm 吸光度的减小速率可间接反应 ICL 活性。
试剂组成和配制：
提取液：液体 50ml×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 15ml×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 15ml×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂 ×3 瓶 ，-20℃保存；临用前每瓶加入 5ml 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂仍-20℃ 保存；
试剂四：粉剂 ×3 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 5ml 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂分装后 -20℃保存，禁止反复冻融；
试剂五：液体 800μl ×2 支，4℃保存；临用前每支加入 560μl 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂仍 4℃保存；
试剂六：粉剂 ×3 瓶，4℃保存；临用前每瓶加入 5ml 蒸馏水，充分混匀待用。用不完的试剂-20℃保存。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计 、 台式离心机 、水浴锅 、移液器 、 1ml 石英比色皿 、研钵 、冰和蒸馏水
样本的前处理：
1 、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（ 104 个） ：提取液体积（ml） 为 500~ 1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液） ，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s， 间隔 10s，重复 30 次） ； 15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2 、组织：按照组织质量（ g）：提取液体积(ml)为 1 ：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1g 组织，加入 1ml 提取液）， 进行冰浴匀浆 。 15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 570nm，蒸馏水调零。
2、加样表(在 1.5ml 棕色 EP 管中按下表依次加样）：
|
试剂 |
测定管 |
|
试剂一 ( μl） |
300 |
|
试剂二 ( μl） |
250 |
|
试剂三 ( μl） |
300 |
|
试剂四 ( μl） |
300 |
|
试剂五 ( μl） |
20 |
|
样本 ( μl） |
50 |
|
试剂六 ( μl） |
300 |
将上述试剂按顺序加入 1 ml 玻璃比色皿中，加试剂六的同时开始计时，在 340nm 波长下记录 20 秒时 的初始吸光度 A1 和 2 分 20 秒时的吸光度 A2，计算ΔA=A1-A2。
注意：
若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三 、四、五和样本按比例配成混合液，在 37℃（哺乳动物） 或 25℃（其它物种）水浴 5min 以上，测定时加入 1220μl 混合液和 300μl 试剂六测定。
ICL 活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白中每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ICL（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T
=2443×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ICL（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T
=2443×ΔA÷W
3、按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
ICL（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V 反总÷ (ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T
=4.886×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1.52×10-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d： 比色皿 光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 ml；V 样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，2 min；Cpr： 样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
| 相关新闻： |
0551-66107970
地址：安徽省合肥市蜀山区经济开发区湖光路自主创新产业基地三期（南区）B座版权所有 © 合肥莱尔生物科技有限公司 皖ICP备17006278号-2
发邮件给我们：737388448@qq.com